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基因突变实验

  

TAG:   动物试验    发布时间:2019-10-09

基因突变实验去哪里做?中化所可做各类基因突变试验,独立的生物学检测中心,包括各细胞基因突变试验等,出具第三方基因突变实验检测报告。

检测范围

体外哺乳类细胞基因突变实验,化妆品基因突变实验,小鼠淋巴瘤基因突变实验,酵母菌基因突变实验,

基因突变实验

野生型质粒构建

1.引物设计:根据需要验证的基因序列,设计需要扩增的基因片段引物。

2. 线性化质粒:将原始的质粒载体,比如 pcDNA3.1 质粒,选择合适的酶切位点,比如 NheI/KpnI 进行酶切,获得线性化的质粒。

3. 质粒连接:将线性化的载体与目的基因的连接,推荐在 10~20μl 反应体系中进行连接反应,可以选择 T4 酶进行黏性末端的连接。

4. 转化涂板:将连接产物转化到受体菌中(一般为 DH5a),涂板,培养过夜。次日,挑取平板上单克隆菌落进行摇菌, 送菌液测序,得到野生型质粒。

突变型质粒构建

在得到野生型质粒之后,下一步就是对目的基因片段进行突变啦,即将目的基因上面的一个碱基或多个碱基换成另外的碱基。

1.突变引物设计: 向质粒进行单点或者多点突变,只需要设计一对引物,进行 PCR 的扩增,替换掉野生型基因的突变位点碱基。

2.突变质粒的扩增:突变质粒的扩增过程中,需要选用高保真酶 Pfu 酶进行质粒扩增, 防止引进新的突变。通过 PCR 过程,突变型质粒也得到了扩增。

3. 得到 PCR 产物后,将产物立即置于冰上,然后在 PCR 反应体系中加入 1 微升 Dpn I,混匀后 37℃孵育 1-2 小时。DpnI 能够识别甲基化位点并将其酶切。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的,DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。

4. 最后,将酶切后产物转化入大肠杆菌,通过涂板挑取单克隆菌落后,摇菌测序,这样就可以得到突变基因的质粒啦。

检测标准

《化学品:体外哺乳动物细胞基因突变试验方法(GB/T 21793-2008)》

本文地址: http://www.bjhgyjs.cn/news/qitajiance/2019/1009/2539.html

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