在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的寡核苷酸探针，按核酸杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体 经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的RNA分子。
原位杂交步骤：
1.玻片处理；

2.组织处理；

3.切片处理；

4.灭活；

5.暴露 mRNA 核酸片段（消化）；

6.预杂交；

7.杂交；

8. 杂交后洗涤；

9. 封闭；

10. 加生物素化鼠抗地高辛；

11. SABC显色；

12.滴加生物素化过氧化物酶；

13. DAB 显色；

14.  复染；

  注意事项：           

1、固定时间越长，mRNA破坏的越多；做原位杂交组织固定时间不宜过长，一般24h。

2、在整个杂交前处理过程都需戴消毒手套，避免RNA污染。

3、蛋白酶K的用量和作用时间要严格把握。

4、杂交后的洗涤均有助于减低背景染色，遵循盐溶液浓度由高到低而温度由低到高的原则。

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