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博来霉素多次染毒诱导C57BL/6J小鼠肺纤维化模型

博来霉素多次染毒诱导C57BL/6J小鼠肺纤维化模型项目报价？解决方案？检测周期？样品要求？(不接受个人委托)

发布时间：2023-02-22 16:14:34 点击：

资源中文名称	博来霉素多次染毒诱导C57BL/6J小鼠肺纤维化模型
资源英文名称	Murine pulmonary fibrosis model induced by repetitive intratracheal administration of bleomycin
疾病概述	特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种慢性、进行性、纤维化性间质性肺疾病，病变局限在肺脏，好发于中老年人群，其肺组织学和/或胸部高分辨率CT（HRCT）特征性表现为普通型间质性肺炎（UIP），病因不清。按病程有急性、亚急性和慢性之分，本病多为散发，据统计，每年整体人群中的患病率约（2～29）/10万，且呈逐渐增长趋势，估计以每年11%的比例增长。在美国特发性肺纤维化患者大约有100000人，欧盟地区大约有110000人，而且每年欧盟地区新增IPF患者35000人。日本每年整体人群中的IPF患病率约（2.23～10）/10万，实际值远高于这个数目。我国作为一个老龄化严重的国家，目前IPF患病人数也是逐年增加，保守估计至少在50万左右。作为一种慢性间质性肺病，IPF起病隐匿、病情逐渐加重，也可表现为急性加重。IPF诊断后的平均生存期仅2.8年，死亡率高于大多数肿瘤，IPF被称为一种“类肿瘤疾病”。 2018年5月11日，国家卫生健康委员会等5部门联合制定了《第一批罕见病目录》，特发性肺纤维化被收录其中。
实验动物背景信息	利用C57BL/6J小鼠制备肺纤维化模型。
模型制作方法	3.1实验动物 C57BL/6J小鼠45 只（SPF 级），体重20--22g，10-12周，购自北京华阜康生物科技股份有限公司〔动物合格证：SCXK（京）2015-0035〕，饲养和实验在中国医学科学院医学实验动物研究所动物房屏障环境内进行，温度为20-26℃，相对湿度50%-60%。 3.2试剂博来霉素（BLM）：注射用盐酸博来霉素，日本化药株式会社；盐酸氯胺酮注射液：沈阳市兽药厂，兽药字（2011）060022668；细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒：碧云天；核固红染色液（0.5%）：北京雷根生物技术有限公司。 3.3模型建立 14周龄的雄性小鼠按体重随机分为未处理组（n=5）和处理组（n=40），处理组气管滴注BLM溶液（0.4 mg/ ml，每只100ul），未处理组小鼠不经任何处理，处理组小鼠用注射用盐酸氯胺酮150mg/kg腹腔注射麻醉，固定，暴露声门，用接套管的1ml注射器气道给药。两星期给药一次，给药8次，第一次给药为0周，在0.5个月、1个月、2个月、4个月时分别取肺组织，称重，取右肺中叶做冰冻切片，剩余肺组织10%中性甲醛中固定制备石蜡切片做HE染色、Masson染色。 3.4 HE染色肺组织10%中性甲醛中固定24h，常规脱水、石蜡包埋后，切片5um，进行苏木素—伊红染色，普通光学显微镜（BX50，Olympus, Japan）下观察肺组织病理学改变，病理学镜检人员进行单盲评分。 3.5 Masson染色肺组织石蜡切片脱蜡，蒸馏水冲洗，Masson染色复合液染色5min，自来水冲洗，0.2%醋酸浸洗，自来水冲洗，1%磷钨酸，水洗后亮绿染色液染色15min，水洗，0.2%醋酸浸洗，水洗片刻，脱水、透明、固封。 3.6 肺系数小鼠在BLM处理0.5个月、1个月、2个月、4个月四个时间点分别取肺组织，称重，计算肺系数。肺系数=肺组织重量（mg）/小鼠体重（g）。 3.7 冰冻切片小鼠在0.5个月、1个月、2个月、4个月四个时间点分别取右肺中叶，速冻后，将肺组织浸没在适量的包埋剂中，用冰冻组织切片机制作8um的切片。 3.8 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色方法肺组织冰冻切片按试剂盒说明操作。先用试剂盒中固定液固定15min，PBS洗3次，每次3min，配置染色液，滴加到冰冻切片上，37℃培养箱（无CO₂）过夜后，PBS洗一遍，核固红（0.5%）复染15min，使细胞核变为红色，便于区分细胞。 3.9 统计学分析采用SPSS 22.0统计软件对数据进行分析，结果以均数±标准差（±S）表示，多组间比较采用单因素方差分析和t检验，P<0.05 为差异有统计学意义。
动物模型的评价与验证	评价该动物模型主要采取病理学方法进行半定量评价，动物生理、生化和影像学方法作为辅助指标。
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