人鼠黑色素瘤B16荧光素酶标记肿瘤模型

B16黑色素瘤细胞(简称B16细胞)是来源于C57BL黑小鼠皮肤的自发性肿瘤。

裸鼠, 先天性胸腺缺陷的突变小鼠，是由于第Ⅶ连锁群（Linkage group）内裸体位点的等位基因发生纯合而形成的突变小鼠新品种。裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小鼠（nu/+）各方面表现都正常。

1. 细胞：B16小鼠黑色素瘤细胞系(购自医科院肿瘤所)；表达载体构建：构建chicken β-actin-luc-NEO载体。CAG启动子由巨细胞病毒（the cytomegalovirus，CMV)早期增强子（early enhancer element）和鸡β-肌动蛋白（ chicken beta-actin ）启动子组成，用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。

2. B16-Luc荧光细胞获得：采用脂质体2000转染B16细胞，转染后24 h，用含有G418的培养液筛选细胞三周，获得稳定表达luciferase的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养。

3. 肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的转染细胞，稀释至5×10⁶／mL。取BALB／CA- nu裸鼠（5周龄，体重15-18 g）进行尾静脉接种，1×10⁶个细胞/只。分别在接种的第7、14和21天四个时间点观察肿瘤的生长及转移情况情况。观察前每只小鼠腹腔注射荧光素底物(1.5mg/10 g)，饱和三溴乙醇(0.18 mL/10 g)麻醉后放入活体荧光影像系统摄像，Slide Book 4.0软件进行分析。采用活体荧光影像系统摄像动态观察。