小鼠肺腺癌LA795绿色荧光标记细胞BTT739小鼠肿瘤模型

小鼠肺腺癌LA795细胞系是上皮样贴壁细胞，1979年5月建系；取自T739近交系小鼠自发乳头型肺腺癌。原代培养建系，24小时细胞开始生长，首次传代45天,上皮样圆形细胞，贴壁生长 ，T739、615、KM小鼠皮下移植成功；T739小鼠肺100%转移。 

T739小鼠，鼠科（Family Muridae）,小鼠属（Mus musculus），是一种土黄色近交系小鼠，是615近交系小鼠与昆明小鼠杂交后兄妹交配培育成功，经皮肤移植、生化电泳方法检测基因位点、毛色基因等指标监测符合近交小鼠标准，并已经通过鉴定。小鼠染色体C带大小存在多态性，亦即各近交系小鼠的某些对同一号染色体C带大小不同，可作为鉴别近交系小鼠以及遗传监测的一种细胞遗传学指标。

模型制作采用BTT739小鼠，鼠龄5周，体重15-18g，在无特定病原体(specific—pathogen free，SPF)的饲养间饲养。

4.1细胞培养：LA795细胞为本实验室冻存

4.2构建带有筛选标记的载体：chicken-β-actin- promoter-eGFP

图1绿色荧光表达载体的构建

4.3细胞转染和筛选：采用Lipofectamine 2000 Reagent转染LA795细胞。转染后，用含G418的培养液筛选细胞，获得稳定表达GFP的细胞株，选择其中高表达的克隆株扩大培养（图2）。

图2绿色荧光标记的LA795细胞系（200×）

稳定高表达GFP的细胞，在荧光显微镜下均呈强荧光，并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下，传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。

4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像：收集处于生长对数期的高表达细胞株，进行小鼠皮下接种，采用活体荧光影像系统摄像动态观察。