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小鼠成瘤细胞检测

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发布时间：2025-03-04 13:20:27 更新时间：2025-03-26 08:21:17

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

小鼠成瘤细胞检测的原理与应用

小鼠成瘤细胞检测是肿瘤生物学研究和抗肿瘤药物开发中的核心实验技术之一，通过将体外培养的肿瘤细胞移植至免疫缺陷小鼠体内，模拟肿瘤在活体环境中的生长、侵袭及转移过程。该技术广泛应用于评估肿瘤细胞的致瘤性、探究肿瘤发生机制以及筛选潜在抗癌药物。实验过程中需重点关注细胞活力、接种方式、小鼠品系选择及观察周期的设定。随着分子影像技术的进步，活体生物发光成像（IVIS）和微型CT等非侵入性检测手段显著提高了实验数据的精准度，为肿瘤微环境研究和个性化治疗策略提供了重要支撑。

实验设计与细胞培养要点

实验前需选择高致瘤性细胞系（如HepG2、A549或患者来源异种移植模型PDX），并通过STR鉴定确保细胞株无交叉污染。细胞传代时需维持对数生长期，接种前使用0.4%台盼蓝染色验证细胞存活率＞95%。三维细胞球培养技术的引入可更好地模拟实体瘤组织结构，提高成瘤成功率。值得注意的是，不同细胞系的最佳接种浓度存在显著差异，通常需通过预实验确定（范围在1×10⁶至5×10⁶个细胞/只）。

动物模型建立的关键步骤

选择4-6周龄BALB/c裸鼠或NOD/SCID小鼠作为宿主，皮下接种部位多选择右侧腋窝或背部肩胛区。异位移植模型则需采用原位注射技术，如肝癌模型常选择肝包膜下注射。为确保实验可重复性，需严格控制注射体积（通常为100μL PBS悬液）和针头规格（27-30G）。术后每日观察小鼠精神状态，72小时内出现可触及结节视为接种成功标志。

多维检测与数据分析体系

从接种后第7天开始，每周2次使用游标卡尺测量肿瘤长径（L）和短径（W），按公式V=0.5×L×W²计算体积。当肿瘤直径达15mm或体积超过2000mm³时需人道处死。终末检测包括：①离体肿瘤称重并计算抑瘤率；②H&E染色观察组织病理学特征；③免疫组化检测Ki-67、CD31等标志物；④qPCR/Western blot分析关键信号通路变化。采用SPSS软件进行t检验或ANOVA分析，P＜0.05视为显著性差异。

质量控制与伦理规范

实验过程中需严格执行AAALAC认证的动物福利标准，包括提供无菌垫料、恒温恒湿环境和富集设施。常见技术问题包括：①接种后囊肿形成（可通过细胞悬液离心去除死细胞改善）；②异种排斥反应（建议使用CD34+人源化小鼠模型）；③肿瘤自发消退（检查细胞冻存复苏流程）。近年来，PD-1人源化小鼠模型的应用为免疫治疗研究提供了更贴近临床的评估平台。