D-生物素含量(以干基计)检测
D-生物素（D-Biotin），也称为维生素B7或维生素H，是水溶性B族维生素家族中的重要成员。它在人体新陈代谢、细胞生长、脂肪酸合成以及维持皮肤、头发和神经系统的健康方面扮演着至关重要的角色。D-生物素广泛应用于食品强化剂、膳食补充剂、医药制剂及化妆品等领域。准确测定产品中D-生物素的含量，特别是以干基计的含量，对于产品质量控制、标签声称符合性、法规遵从性以及确保其生理功效至关重要。"以干基计"是指计算生物素含量时排除了样品中水分或其它挥发性物质的干扰，将检测结果折算到完全干燥状态下的含量。这种方式提供了更稳定、更可比的浓度数据，尤其适用于原料、粉末、颗粒等形态的样品，因为这些样品的含水量可能存在较大波动。
检测项目
本检测项目的核心目标是定量测定待测样品（如维生素预混料、原料药、强化食品、饲料添加剂等）中D-生物素（化学式：C₁₀H₁₆N₂O₃S）的具体含量。检测结果以"干基"形式报告，即结果表示为每克干燥物质（扣除水分和挥发物后）中所含D-生物素的微克数（μg/g干重）或毫克数（mg/g干重）。该结果直接反映了样品中有效D-生物素成分的真实浓度，不受样品含水量的影响。
检测仪器
进行D-生物素含量（以干基计）的检测，通常需要依赖高灵敏度和高选择性的分析仪器组合，主要设备包括：
1. 高效液相色谱仪（HPLC）： 这是现代测定维生素（尤其是水溶性维生素）的核心仪器。系统通常配备：
- 高压输液泵： 用于精确输送流动相。
- 自动进样器： 提高进样精度和重现性。
- 柱温箱： 保持色谱柱温度恒定，优化分离效果。
- 紫外-可见光检测器（UV-Vis Detector）或二极管阵列检测器（DAD）： D-生物素在紫外光区（通常在210-220 nm附近）有特征吸收，是常用的检测器。
- 色谱柱： 通常选用适合分离极性化合物的反相C18色谱柱（如250mm x 4.6mm, 5 μm粒径）。
2. 分析天平： 精度需达到万分之一克（0.0001 g）或更高，用于精密称量样品和标准品。
3. 恒温干燥箱： 用于测定样品的水分及挥发物含量（干燥失重）或在样品前处理步骤（如酶解）中提供恒温环境。
4. pH计： 用于调节样品溶液或流动相的pH值。
5. 超声波清洗器/水浴超声波仪： 用于加速样品的溶解或提取。
6. 离心机： 用于样品提取液或酶解液的澄清处理。
7. 真空抽滤装置： 配备0.22μm或0.45μm微孔滤膜，用于过滤样品溶液和流动相。
8. 恒温水浴锅/磁力搅拌器： 用于样品溶解、酶解或衍生化（如果需要）过程中的温度控制。
检测方法
目前，高效液相色谱法（HPLC）是测定D-生物素含量（包括以干基计）最常用、最成熟且被广泛认可的标准方法，其主要步骤包括：
1. 样品前处理：
* 干燥失重测定： 取适量代表性样品，在105°C±2°C（或方法规定的特定温度）下干燥至恒重，计算水分及挥发物的含量（%）。这是计算"干基"含量的基础。
* 样品制备：
* 精密称取一定量样品（已记录原始重量），置于合适容器中。
* 根据样品基质（可能含结合态生物素）和检测标准要求，可能需要加入特定缓冲液（如磷酸盐缓冲液）或酶（如木瓜蛋白酶）进行水解处理，将结合态的D-生物素释放出来。此步骤可能需要在特定温度（如37°C）下恒温水浴并持续搅拌。
* 水解后，溶液可能需调节pH值。
* 用适宜溶剂（通常为水或含有少量酸的流动相）定量稀释定容。
* 将溶液充分混匀、离心或过滤（0.45μm滤膜）以得到澄清的上清液或滤液供HPLC分析。
2. 标准溶液配制： 精密称取D-生物素标准品（已知纯度），用适当溶剂溶解并逐级稀释，配制一系列浓度的标准工作溶液（通常5-7个点）。
3. 色谱条件优化：
* 流动相： 常用的是缓冲液-有机相体系，例如：磷酸盐缓冲液（pH ~6.0-7.0）与甲醇或乙腈以一定比例混合（如85:15 v/v）。具体比例和pH值需根据色谱柱和标准方法优化。
* 流速： 通常在0.8-1.5 mL/min范围内。
* 检测波长： 通常设定在210-220 nm（根据D-生物素的最大吸收峰）。
* 柱温： 通常设置在30-40°C。
* 进样量： 通常为10-50 μL。
4. HPLC分析：
* 依次进样标准工作溶液和样品溶液。
* 记录色谱图，确保D-生物素峰与杂质峰达到良好分离（分离度 R ≥ 1.5）。
* 测量D-生物素峰的保留时间和峰面积（或峰高）。
5. 数据处理与计算：
* 以标准工作溶液的浓度为横坐标（X），相应的峰面积（或峰高）为纵坐标（Y），绘制标准曲线（通常为线性回归）。
* 根据样品溶液的峰面积（或峰高），从标准曲线上查得对应的浓度（C_sample），此浓度通常是样品提取液中的浓度（μg/mL）。
* 计算样品中D-生物素含量（以干基计）：
生物素含量 (μg/g干基) = [ (C_sample * V * D * F) / W ] * 1000 / (100 - M)
其中：
C_sample：从标准曲线得到的样品溶液浓度 (μg/mL)
V：样品定容体积 (mL)
D：稀释倍数（如有）
F：转换因子（如单位转换等，通常为1）
W：用于前处理的原始样品重量 (g)
M：样品干燥失重（水分和挥发物）百分含量 (%)
*1000：将mg/g转换为μg/g（如果C_sample单位是μg/mL，计算结果单位是μg/g干基）
检测标准
为了确保检测结果的准确性、可靠性和可比性，D-生物素含量（以干基计）的检测必须严格遵循权威机构发布的标准方法。主要的国内外标准包括：
1. 中国国家标准 (GB)：
* GB 5009.259-2016 《食品安全国家标准 食品中生物素的测定》：这是中国针对食品基质中生物素测定的强制性标准。标准规定了使用微生物法（第一法）和高效液相色谱法（第二法）测定食品中生物素（包括D-生物素）的含量。HPLC法是首选方法。该方法对样品前处理（包括酶解）和HPLC条件有详细规定。
* GB 14754-2010 《食品安全国家标准 食品添加剂 维生素C（抗坏血酸）》：虽然主要针对VC，但附录中也可能包含相关维生素的参考方法（需查阅具体版本）。更直接的是参考原料药标准或药典。
2. 中华人民共和国药典 (ChP)：
* 《中国药典》通则 / 各论： 对于作为药品原料或制剂的D-生物素，《中国药典》的相关品种项下会明确规定其含量的测定方法（通常是HPLC法）和质量标准（包括干燥失重的限度要求）。"含量"项下的结果通常是以无水物或干燥品计。
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CMA认证
检验检测机构资质认定证书
证书编号：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS认可
实验室认可证书
证书编号：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO认证
质量管理体系认证证书
证书编号：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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