三甲氧苄氨嘧啶(TMP)检测

三甲氧苄氨嘧啶（Trimethoprim, TMP）是一种广谱抗菌剂，常与磺胺类药物（如磺胺甲噁唑SMX）联合使用，通过双重阻断细菌的叶酸合成途径来增强抗菌效果（如复方新诺明）。TMP广泛应用于人类医药、兽医领域及水产养殖业。然而，TMP的不合理使用或滥用可能导致其在动物源性食品（如肉类、乳制品、水产品）及环境水体中残留，进而可能通过食物链传递对人体健康构成潜在威胁（如过敏反应、肠道菌群失调、甚至促进细菌耐药性发展）。因此，建立灵敏、准确、高效的TMP检测方法，对保障食品安全、评估环境污染程度、监控药物合理使用以及满足国内外法规要求至关重要。

检测项目

TMP检测的核心项目通常包括：

• 残留量检测： 主要针对动物源性食品（肌肉、肝脏、肾脏、脂肪、乳、蛋、蜂蜜等）、水产品、饲料、环境样品（水、土壤）以及药品制剂中TMP及其主要代谢物的含量。
• 纯度与含量测定： 在TMP原料药及制剂生产过程中，对其主成分含量、有关物质（杂质）进行控制。
• 非法添加筛查： 在非预期含有TMP的产品（如某些宣称无抗的食品或保健品）中进行筛查。

检测仪器

TMP检测主要依赖精密的分析仪器，常用的包括：

• 高效液相色谱仪（HPLC）： 最常用的检测设备，尤其配备紫外检测器（UV）或二极管阵列检测器（DAD）。适用于含量测定、有关物质检查及残留量检测（需满足灵敏度要求）。
• 液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）： 目前残留检测的金标准。具有极高的灵敏度、特异性和准确性，能同时检测TMP及其多种代谢物和同类药物，尤其适用于复杂基质（如动物组织、饲料、环境样品）中痕量残留的定性和定量分析。
• 紫外-可见分光光度计（UV-Vis）： 可用于TMP原料药或简单制剂中主成分的快速含量测定，但特异性相对较低。
• 酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒： 基于抗原抗体反应，适合大批量样品的快速初筛，具有操作简便、快速的特点，但需注意可能存在假阳性/假阴性，定量精度通常不如色谱法。

检测方法

TMP检测通常包含以下关键步骤：

1. 样品前处理： 这是关键步骤，直接影响结果的准确性和灵敏度。
   • 提取： 使用合适的溶剂（如乙腈、甲醇、酸化/碱化有机溶剂混合液、缓冲盐溶液）将TMP从样品基质（如组织匀浆、液体样品、粉碎的饲料/药品）中溶解出来。
   • 净化： 去除提取液中的脂肪、蛋白质、色素等干扰物质。常用方法包括液液萃取（LLE）、固相萃取（SPE，常用C18、HLB、MCX等填料）、QuEChERS法等。对于LC-MS/MS分析，净化要求尤其高。
   • 浓缩与复溶： 将净化后的提取液浓缩至较小体积（如氮吹），并用适合仪器分析的溶剂（如初始流动相）复溶或定容。
2. 仪器分析：
   • HPLC-UV/DAD： 优化色谱条件（色谱柱：常选用C18柱；流动相：甲醇/乙腈-缓冲盐溶液；流速；柱温；检测波长：~230nm或~270nm附近）进行分离和定量。
   • LC-MS/MS： 在优化液相分离条件的基础上，选择合适的离子源（ESI+），优化质谱参数（母离子、子离子、碰撞能量等），采用多反应监测模式（MRM）进行高灵敏度、高选择性的检测。
   • ELISA： 严格按照试剂盒说明书操作，进行加样、孵育、洗涤、显色、终止反应和测定吸光度值。
3. 定量分析： 使用标准曲线法或内标法进行定量。LC-MS/MS常用同位素内标（如TMP-D₉）以提高定量的准确性。

检测标准

TMP的检测需遵循国内外相关法规和标准方法，确保结果的可靠性和可比性。主要标准包括：

• 食品安全国家标准（中国GB）：
  • GB 31658.17-2021 《动物性食品中四环素类、磺胺类和氯霉素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》：明确规定了动物性食品（肌肉、肝脏、肾脏、脂肪、鱼虾、牛奶、鸡蛋）中TMP残留检测的LC-MS/MS方法（包括前处理、仪器参数、定量限、判定限等）。
  • GB/T 21316-2007 《动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》：虽主要针对磺胺，但部分方法也适用于TMP或其复方制剂残留的检测。
  • GB/T 20764-2006 《可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素和磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-紫外检测法》：可用于肌肉中TMP的HPLC-UV检测（灵敏度可能低于LC-MS/MS）。
• 中国药典（ChP）： 对TMP原料药的质量标准规定了性状、鉴别、检查（如有关物质、干燥失重、灼炽残渣）、含量测定（HPLC法）等项目和方法。
• 国际/国外标准：
  • 欧盟指令（EU）及欧盟参考实验室（EURL）方法：对动物源性食品中TMP等药物残留有严格的最高残留限量（MRL）要求和推荐检测方法（主要基于LC-MS/MS）。
  • 美国食品药品监督管理局（FDA）方法：发布有用于食品和饲料中兽药残留检测的官方方法（如LC-MS/MS方法）。
  • 日本肯定列表制度：规定了食品中TMP的限量要求和检测方法。
  • 国际标准化组织（ISO）、国际兽药法典委员会（CCRVDF）等也有相关指导文件。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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