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赭曲霉毒素 A检测

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发布时间：2025-07-21 05:16:07 更新时间：2025-07-20 05:16:07

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

赭曲霉毒素A检测：保障食品安全的关键防线

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A, OTA）是由曲霉属（如赭曲霉、碳黑曲霉）和青霉属（如疣孢青霉）等丝状真菌产生的一种具有强肾毒性、肝毒性、致畸性、致突变性和潜在致癌性的真菌毒素。它广泛污染谷物（如小麦、玉米、大麦、燕麦）、咖啡豆、葡萄及葡萄酒、葡萄干、香料、坚果、动物饲料等多种农产品及食品原料。由于其稳定性强，能在加工和储存过程中持续存在，并通过食物链富集，对人体健康构成严重威胁。因此，建立灵敏、准确、高效的赭曲霉毒素A检测体系，对于监控食品和饲料安全、保护消费者健康、符合国内外法规要求、促进贸易畅通具有极其重要的意义。

检测项目

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A）是本检测的核心目标分析物。检测项目具体包括：

定性检测： 确认样品中是否存在赭曲霉毒素A。
定量检测： 精确测定样品中赭曲霉毒素A的含量，通常以微克每千克（μg/kg）或微克每升（μg/L）表示。这是最重要的检测目标，用于评估是否超出法规限量标准。
相关基质检测： 根据需求，可扩展到检测其他赭曲霉毒素（如赭曲霉毒素B、C），但OTA是主要关注对象和最常检测的指标。

检测仪器

赭曲霉毒素A的分析检测依赖于一系列精密的分析仪器，核心设备包括：

高效液相色谱仪（HPLC）： 这是目前检测OTA最经典和主流的仪器，尤其与荧光检测器（FLD）联用。
- 荧光检测器（FLD）： OTA本身具有天然荧光特性，HPLC-FLD是因其高灵敏度、选择性和相对较低成本而成为常规检测的首选方法。
高效液相色谱-串联质谱联用仪（HPLC-MS/MS）： 提供更高的灵敏度、选择性和确认能力。尤其适用于复杂基质（如香料、中草药）、需要同时检测多种真菌毒素或痕量水平（ppb甚至ppt级）的检测，是确证和高端研究的主要工具。
免疫亲和柱净化系统： 用于样本前处理，基于抗原-抗体特异性结合原理，选择性吸附OTA，有效去除样品中的干扰杂质，大幅提高检测的准确性和灵敏度。
固相萃取装置（SPE）： 另一种常用的净化手段，利用不同填料对目标物和杂质的吸附/洗脱差异进行净化。
均质器/粉碎机： 用于样品的粉碎和均质化。
离心机： 用于样本提取液的分离。
旋转蒸发仪/氮吹仪： 用于溶液浓缩。
酶联免疫吸附测定仪（ELISA Reader）： 用于基于免疫学原理的快速筛查法（ELISA试剂盒），适用于大批量样品的初筛。

检测方法

赭曲霉毒素A的检测是一个包含样本前处理和仪器分析的系统过程，主要方法如下：

样本前处理（关键步骤）：
- 提取： 通常使用酸性有机溶剂混合物（最常用的是乙腈/水/乙酸或甲醇/水）对粉碎均质的样品进行振荡或均质提取，将OTA从基质中溶解出来。
- 净化： 去除提取液中干扰检测的脂类、蛋白质、色素等杂质。主要方法：
  - 免疫亲和柱净化法： 利用OTA特异性抗体键合在柱填料上，选择性吸附OTA，洗去杂质后，再用洗脱溶剂将OTA洗脱下来。该法净化效果好，回收率高，是目前国际主流和推荐的方法（尤其与HPLC-FLD或LC-MS/MS联用）。
  - 固相萃取法（SPE）： 常使用C18柱、混合型阴离子交换柱等进行净化。
- 浓缩与复溶： 将净化后的洗脱液适当浓缩、吹干或稀释，复溶到适合仪器进样的溶剂体系中。
仪器分析：
- HPLC-FLD法：
  - 色谱柱：常用反相C18色谱柱。
  - 流动相：乙腈/水/乙酸或甲醇/水/乙酸的混合体系。
  - 检测：激发波长~333 nm，发射波长~477 nm (具体波长需根据仪器优化)。根据保留时间和特征荧光峰进行定性与定量。
  - 特点：灵敏、稳定、成本相对较低，是官方机构和企业实验室广泛使用的常规方法。
- LC-MS/MS法：
  - 色谱分离条件类似HPLC。
  - 质谱检测：在ESI负离子模式下，监测OTA的母离子（m/z 403.8 → [M-H]⁻）及其特征子离子碎片（如 m/z 358.8, 239.0）。通过多反应监测（MRM）模式进行高选择性、高灵敏度检测。
  - 特点：灵敏度极高（可达ppt级），抗干扰能力强，可同时检测多种真菌毒素，是复杂基质检测、痕量分析和确证的金标准。
- 酶联免疫吸附法（ELISA）：
  - 基于抗原-抗体反应原理的快速筛选方法。
  - 通常采用竞争法，样品中的OTA与固定在微孔板上的OTA抗原竞争结合特定的酶标记抗体。
  - 通过底物显色，利用酶标仪测定吸光度值，间接计算OTA含量。
  - 特点：操作相对简便、快速、高通量，成本低，适用于现场快速筛查和大批量样本初筛。但可能存在一定的假阳性/假阴性，阳性结果通常需用色谱法进行确证。

检测标准

为确保检测结果的准确性、可靠性和可比性，赭曲霉毒素A的检测必须遵循国家或国际认可的标准方法。国内外主要相关标准包括：

国际标准：
- ISO 15141 系列： 《谷物、谷物制品和动物饲料中赭曲霉毒素A的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法》(ISO 15141-1:1998) 和《... 免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱法》(ISO 15141-2:1998)。
- CEN 系列： 欧洲标准委员会（CEN）也制定了类似的标准（如EN...）。
中国国家标准（GB）：
- GB 5009.96-2016： 《食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A的测定》。这是中国现行最主要的强制性检测标准，详细规定了：
  - 第一法：免疫亲和层析净化高效液相色谱法（核心方法，类似ISO 15141-1）。
  - 第二法：免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法（确证方法）。
  - 第三法：同位素稀释液相色谱-串联质谱法（高精度确证法）。
- GB 2761-2017： 《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》。该标准规定了OTA在各种食品（如谷物及其制品、豆类及其制品、葡萄酒等）中的最大允许限量（MRLs），是判定检测结果是否合格的根本依据。
行业标准/地方标准： 如SN/T进出口检验检疫标准、农业行业标准等也可能包含特定产品中OTA的检测规定。