致泻大肠埃希菌检测：守护食品与公共卫生安全的关键防线
大肠埃希菌（*Escherichia coli*），通常称为大肠杆菌，是人和温血动物肠道中的正常菌群之一。然而，某些特定血清型或携带特定毒力基因的大肠埃希菌菌株具有致病性，能引起人类严重的胃肠炎，统称为致泻大肠埃希菌（Diarrheagenic *E. coli*, DEC）。这些致病菌株主要通过污染的水源、食物（尤其是未煮熟的肉类、生鲜蔬果、生乳及其制品）或人与人接触传播，是引起旅行者腹泻、婴幼儿腹泻甚至溶血性尿毒综合征等严重并发症的重要病原体。由于其引起的疾病症状多样，从轻度腹泻到危及生命的重症不等，且传播迅速，对公共卫生安全构成显著威胁。因此，建立快速、准确、灵敏的致泻大肠埃希菌检测体系，对于食源性疾病暴发的溯源调查、食品安全监管、临床诊断治疗以及预防控制措施的制定至关重要。
检测项目
致泻大肠埃希菌检测的核心目标是识别和确认样品（如食品、水、粪便、环境样本）中是否存在特定的致病性大肠埃希菌菌株，并尽可能区分其致病型别。主要的检测项目包括：
1. 总大肠菌群/大肠埃希菌计数：常作为卫生学指示指标，初步评估样品污染程度。
2. 目标致病菌株的分离与鉴定：针对不同类型的致泻大肠埃希菌进行特异性检测，主要包括：
* 肠产毒性大肠埃希菌：检测不耐热肠毒素和/或耐热肠毒素。
* 肠致病性大肠埃希菌：检测特定的血清型（如O55， O111， O114等）和/或毒力基因。
* 肠侵袭性大肠埃希菌：检测其侵袭上皮细胞的能力或相关基因。
* 肠出血性大肠埃希菌/产志贺毒素大肠埃希菌：这是检测的重中之重，特别是O157:H7血清型，以及重要的非O157血清型（如O26， O45， O103， O104， O111， O121， O145等），核心是检测志贺毒素和/或相应的基因。
* 肠集聚性大肠埃希菌：检测其特殊的粘附模式或相关基因。
* 弥散粘附性大肠埃希菌：检测其弥散粘附特性或相关基因。
3. 毒力因子检测：直接检测关键的毒力基因（如stx1, stx2, eae, bfp, ipaH, elt, est, aggR, astA等）或表达的毒素（如志贺毒素）。
4. 血清分型：确定分离株的O抗原（菌体）和H抗原（鞭毛）型别。
5. 分子分型：用于暴发溯源，如脉冲场凝胶电泳、多位点序列分型或全基因组测序。
检测仪器
致泻大肠埃希菌检测是一个多步骤过程，涉及多种仪器设备：
1. 样品制备设备：均质器/拍打式均质器、离心机、漩涡混合器、水浴锅/金属浴、微量移液器。
2. 培养与分离设备：
* 恒温培养箱（用于35-37°C常规培养，有时需要特定温度如44°C用于选择性增菌）。
* 厌氧培养系统（针对某些特定菌）。
* 微生物自动接种仪（可选）。
3. 生化鉴定设备：
* 生化反应管/板。
* 自动化微生物鉴定系统（如VITEK 2， BD Phoenix, MicroScan WalkAway等）。
4. 免疫学检测设备：
* 酶标仪（用于酶联免疫吸附试验）。
* 免疫磁珠分离系统（常用于EHEC/O157:H7的富集）。
* 侧向层析试纸条阅读仪（可选，用于快速检测试纸条结果判读）。
5. 分子生物学检测设备（核心）：
* 聚合酶链式反应仪：用于靶基因的扩增，是检测毒力基因的金标准方法之一。包括常规PCR仪和实时荧光定量PCR仪。实时荧光定量PCR仪可同时实现扩增和检测，具有速度快、灵敏度高、可定量（相对）、闭管操作减少污染风险等优势。
* 核酸提取纯化系统：手动或自动化设备，用于从样本中提取高质量DNA/RNA。
* 电泳系统：用于常规PCR产物的分离和可视化（琼脂糖凝胶电泳槽、凝胶成像系统）。
* 恒温扩增设备：如环介导等温扩增仪，操作更简单快速。
6. 血清学分型设备：玻片、凝集反应板等。
7. 菌种保存设备：超低温冰箱（-70°C或以下）、液氮罐。
检测方法
致泻大肠埃希菌的检测方法多样，通常根据检测目的、样本类型、时效要求和实验室条件选择或组合使用：
1. 传统培养法：
* 原理：利用选择性培养基分离目标菌，通过菌落形态、生化反应（如IMViC试验）、血清学凝集试验进行鉴定。
* 步骤：样品前处理→选择性增菌（如mEC+n肉汤）→选择性平板分离（如麦康凯琼脂、山梨醇麦康凯琼脂、显色培养基）→可疑菌落挑选→生化鉴定→血清学分型→毒力试验（细胞培养、动物试验，现已较少用）或毒力基因检测。
* 特点：是基础方法，可分离活菌用于后续研究，但耗时长（通常4-7天），步骤繁琐，灵敏度易受干扰。
2. 免疫学方法：
* 酶联免疫吸附试验：检测菌体抗原（如O157抗原）或毒素（如志贺毒素）。
* 免疫磁珠分离：利用特异性抗体包被的磁珠富集目标菌（如O157），显著提高后续培养或检测的灵敏度。
* 乳胶凝集试验：用于菌落或增菌液的血清型快速初步鉴定。
* 侧向层析免疫层析试纸条：快速检测抗原或毒素，适合现场筛查。
* 特点：相对快速（几小时至一天），操作较简便，但可能存在交叉反应，灵敏度有时不如分子方法。
3. 分子生物学方法（目前主流和趋势）：
* 聚合酶链式反应：
* 常规PCR：扩增特定毒力基因（如stx1, stx2, eae），通过凝胶电泳判断结果。可进行多重PCR同时检测多个靶标。
* 实时荧光定量PCR：在扩增过程中通过荧光信号实时监测产物量，无需开盖，大大减少污染，灵敏度高，可定量，速度快（通常2-4小时出结果），且可设计多重检测。是目前检测毒力基因最常用、最灵敏可靠的方法之一。也可设计血清型特异性引物/探针进行鉴定。
* 环介导等温扩增：在恒定温度下进行核酸扩增，设备要求低，速度快（通常1小时内），适合现场或资源有限地区使用。
* 基因芯片/DNA微阵列：可高通量检测大量毒力基因和血清型标记物。
* 全基因组测序：提供最全面的信息，用于精准分型、溯源和毒力因子分析，成本高且数据分析复杂，主要用于研究或暴发调查。
* 特点：特异性高，灵敏度高，速度快（尤其qPCR和LAMP），可直接检测样本（有时需增菌），能区分致泻类型。是快速确诊和筛查的首选。
方法选择通常需要结合。例如，在食品检测中常采用：样品增菌 → 免疫磁珠富集 → 平板分离培养 → 菌落PCR/qPCR确认毒力基因；或者增菌后直接
CMA认证
检验检测机构资质认定证书
证书编号：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS认可
实验室认可证书
证书编号：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO认证
质量管理体系认证证书
证书编号：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
扫一扫，更多精彩
