| 资源中文名称 | CTLA4人源化小鼠模型 |
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| 资源英文名称 | CTLA4 humanized mouse model |
| 疾病概述 | 在正常的免疫过程中，T细胞的有效激活是其能发挥免疫效应的前提及保证，若T细胞的活化不完全或者处于免疫应答无能状态时，则不能发挥杀灭肿瘤细胞的作用。T细胞的活化需要双信号同时刺激，即第一信号和第二信号的协同作用。第一信号来自于APC细胞表面的抗原肽-MHC复合物和T细胞表面的相对应受体相结合所传导，第二信号来自于APC细胞表面的共刺激分子与T细胞表面的相对应受体相结合所传导。 目前已经知道的最主要的共刺激分子是B7-1和B7-2，他们所对应T细胞表面受体为CD28，他们结合传递的是刺激性第二信号，和第一信号协同刺激T细胞的活化。近年来的研究发现，CTLA4与CD28会竞争性的与B7蛋白家族相结合，并且CTLA4与B7蛋白结合的亲和力是CD28的二十多倍，他们结合后在免疫反应的前期阶段传递抑制性信号，导致T细胞的活化受到抑制。免疫检验点CTLA4相当于是机体进化出来的刹车机制，它在维持免疫内稳态及防止免疫系统用力过猛之间发挥着重要作用，肿瘤细胞可以通过激活CTLA4信号通路从而躲避机体的抗肿瘤免疫效应。 |
| 实验动物背景信息 | c57bl/6小鼠也被称为c57 black 6，1921年被培育出来，属于近交品系。该品系的最主要的两个特点就是品系稳定和易于繁殖。另外c57bl/6小鼠是第一个完成基因组测序的小鼠品系。 |
| 模型制作方法 | 利用CRISPR /Cas9 技术，建立CTLA4基因人源化小鼠模型，利用PCR、RT-PCR和Western Blot 的方法进行鉴定及分析。 |
| 动物模型的评价与验证 | 1基因型鉴定 在基因水平鉴定，可以检测到纯合小鼠。 2 该基因在敲除组织部位的蛋白表达水平 对人源化小鼠组织取材，在白细胞中，通过反转录PCR只检测到人源CTLA4基因的表达。 3生长发育和生存率情况 该基因人源化小鼠寿命正常，组织器官中未观察等到淋巴细胞的浸润，在出生后10个月内没有观察到自身免疫性疾病发展的迹象，也未观察到生长情况异常。 4 CTLA4人源化小鼠中，CTLA4单克隆抗体伊匹木减缓肿瘤生长速度 目前批准用于临床的抗CTLA4抗体可以与人源CTLA4结合，但不会与鼠源CTLA4交叉反应[11]。为了检测建立的CTLA4h/h小鼠是否可以用于临床药物筛选，我们比较了CTLA4单克隆抗体伊匹木（Ipilimumab）在CTLA4h/h 和CTLA4m/m小鼠中抑制肿瘤生长的能力。用黑色素瘤细胞系B16分别移植入CTLA4h/h 和CTLA4m/m小鼠，在移植后第3、5、7天，伊匹木单抗以100μg/只的剂量进行3次腹腔注射，观察肿瘤生长至14天。在CTLA4h/h小鼠中，伊匹木单抗减缓肿瘤生长速度（图6a，b），在第14天时，CTLA4h/h小鼠中肿瘤质量低于CTLA4m/m小鼠（图6c，d）。结果显示，伊匹木单抗可以在我们建立的CTLA4h/h小鼠中发挥有效作用。 注：向CTLA4h/h（左腋下）和CTLA4m/m小鼠（右腋下）皮下注射5×105 B16黑色素瘤细胞，并在第3、5、7天（如箭头所示），腹腔注射依匹木单抗100μg/只，观察并测量肿瘤直径至细胞移植后14天（a，b）。在细胞移植后14天时取出肿瘤称重（c，d）。数据表示平均值±标准误，每组6–8只小鼠。使用单因素方差分析（Dunnett’s test）进行统计。*P < 0.05, P < 0.01。 图5在CTLA4h/h小鼠中，伊匹木减缓B16黑色素瘤生长速度 |
| 保存方式 | 冷冻 |
| 更多相关 | 动物模型制备 |
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