| 资源中文名称 | EV71 MP10 腹腔感染PSGL1-C57BL/6J小鼠模型 |
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| 资源英文名称 | EV71 MP10 intraperitoneally infected PSGL1 C57BL/6J mouse model |
| 疾病概述 | 手足口病（hand, foot, and mouth disease, HFMD）是由肠道病毒引起的，以发热和手、足、口腔、臀部等部位出现皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病。手足口病多发生于入学前儿童，尤其是3岁以内的婴幼儿，少数患者会发展为重症，并发无菌性脑膜炎、脑干脑炎、神经源性肺水肿、急性弛缓性麻痹和心肌炎等，死亡率和致残率较高。人肠道病毒71型（EV71）是手足口病的主要病原体之一，属于微小RNA病毒科，肠道病毒属，主要通过粪口传播，引发婴幼儿手足口病及疱疹性咽峡炎，严重并发症包括无菌性脑膜炎，而神经源性的肺水肿或肺出血是导致婴幼儿死亡的原因之一。EV71病毒最初定植于鼻咽部或胃肠道粘膜，侵入淋巴组织并在其中繁殖，进而引起第一次病毒血症。若机体免疫力差，病毒可扩散至全身组织器官，大量繁殖后再次入血，引起第二次病毒血症，最终侵犯靶器官，如脑、脑膜、脊髓、心肌和横纹肌以及皮肤黏膜组织，引起重症病变，主要病变为神经元坏死等。 |
| 实验动物背景信息 |
C57BL/6J小鼠 |
| 模型制作方法 |
（1）转基因小鼠构建：以人PSGL-1的mRNA为模板，经反转录获得人PSGL-1的cDNA，将其插入pCDNA3.1(+)载体的启动子下游，构建转基因载体。载体经测序验证正确后，将其线性化并经显微注射到C57BL/6J的受精卵中，用129做假孕受体，制备转基因小鼠。转基因小鼠提取鼠尾DNA进行基因鉴定（h-PSGL-F: 5’-CTACCAAAAGAGGTCTGTTC-3’；h-PSGL-R: 5’-ATGAGATGCAGACCATCTCG-3’），采用RT-PCR法检测组织内基因表达情况（h-PSGL-CF: 5’-GTGGTGCTGGCGGTCCG-3’；h-PSGL-CR: 5’-CAGGCCCCCATTGGCTGTG-3’），并用兔抗人PSGL-1的多克隆抗体检测组织内蛋白表达情况。 （2）病毒制备：使用的临床分离株包括：1.FY0805a，2008年分离自安徽省阜阳市，GenBank存储号为HQ882182；2.JK2009,2009年分离自重庆市，GenBank存储号为HQ694982；使用的小鼠适应株为MP10，为FY0805a在小鼠体内连续传代10次后的小鼠适应株，GenBank存储号为HQ712020。EV71在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、繁殖，采用三次冻融法释放病毒，超速离心法富集病毒，病毒储存于超低温冰箱中，病毒储存液浓度为1×109 TCID50/ml。 （3）实验动物：可使用SPF级别的10日龄乳鼠，品系为C57BL/6J-TgN(CMV-Homo-PSGL-1) -ZLFILAS，母鼠自然哺乳，在动物生物安全二级实验室内独立饲养。 （4）病毒感染：根据预实验确定感染剂量，10日龄乳鼠经轻度麻醉后，经腹腔注射1×108 TCID50 的EV71JK2009,攻毒体积为100微升/只；小鼠适应株EV71 MP10的感染剂量为5×106 TCID50，注射体积为100微升/只，空白对照组注射等量RD细胞上清。 |
| 动物模型的评价与验证 | 研究表明PSGL-1蛋白是人的EV71病毒受体之一，在小鼠细胞内表达人PSGL-1蛋白可以提高小鼠细胞对EV71的敏感性。 该模型的这些病理表型类似EV71感染重症病例，可用于EV71重症研究，以及药物筛选和疫苗评价。 |
| 保存方式 | 活体 |
| 更多相关 | 动物模型制备 |
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