铁过载小鼠的活动性结核病模型
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发布时间:2024-05-21 08:15:32 更新时间:2024-10-29 18:09:20
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资源中文名称 | 铁过载小鼠的活动性结核病模型 |
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资源英文名称 | An iron overload TB mouse model |
疾病概述 | 结核病是由结核分枝杆菌(结核菌)引起的一种慢性传染性疾病,结核感染通常会累及肺、淋巴系统及其它多组织器官。除少数发病急促外,临床上多呈慢性过程。常有低热、乏力等全身症状和咳嗽、咯血等呼吸系统表现。感染后潜伏期4~8周,其中80%发生在肺部,其他部位(颈淋巴、脑膜、腹膜、肠、皮肤、骨骼)也可继发感染。 |
实验动物背景信息 |
6~8 周龄 SPF 级雌性 C57BL/6N 小鼠 |
模型制作方法 |
1.1实验材料 C57BL/6N 小鼠(北京维通利华,SCXK (京)-2016-0006),右旋糖酐铁注射液(江西创导动物保健品有限公司),血清铁、铁蛋白、转铁蛋白及可溶性转铁蛋白受体检测试剂盒(酶免公司),组织铁检测试剂盒(南京建成生物工程研究所),普鲁士蓝染色试剂盒(Solarbio),结核分枝杆菌标准株 H37Rv(菌号为 93009,本室保存),中性罗氏培养管(珠海贝索生物),BACTEC MGIT 7H9 98 分枝杆菌快速培养管(BD 公司)。 1.2 实验方法 1.2.1 铁过载小鼠模型建立 6~8 周龄 SPF 级雌性 C57BL/6N 小鼠随机分成阴性对照、低剂量、中剂量和高剂量 4 个小组,实验组分别腹腔注射右旋糖酐铁3.75、7.5、15 mg/次,阴性对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水,3 次/周,共计 4 周。定期观察小鼠生长及精神状态,称重并记录。动物实验经本所实验动物管理和使用委员会(IACUC)批准,批准号为:ZLJ2019001。 1.2.2 血清生化指标与组织铁含量测定 建模完成后将小鼠摘眼球采血,4 ℃凝结过夜,2000 g 4 ℃离心 10 min,分离小鼠血清并检测血清铁、铁蛋白、转铁蛋白及可溶性转铁蛋白受体含量。解剖取小鼠心脏,肝脏、脾脏、肺、肾脏及小肠等组织器官,称重后加 1ml 生理盐水充分研磨并裂解组织碎片,12000 g 4 ℃离心 20 min,取上清并测定蛋白浓度。 血清生化检测按试剂盒说明书进行,组织铁测定则按试剂盒测定方法计算相同蛋白浓度下各组织铁含量。 1.2.3 铁过载小鼠 Mtb 感染 SPF 级 C57BL/6N 随机分成空白对照组、空白 Mtb 感染组、中剂量铁过载模型组和中剂量铁过载模型 Mtb 感染组,每组 6 只。其中 Mtb 感染组小鼠经尾静脉注射对数生长期 H37Rv 单细胞菌悬液 100 μl(1×10 6 CFU/ml),空白对照组注射等剂量无菌生理盐水。本所 ABSL-3 实验室(国卫 ABSL3-059) 正常饲喂, 观察并记录小鼠临床表现,感染后 4 周解剖小鼠。 1.2.4 小鼠组织荷菌量测定 ABSL-3 实验室动物解刨台中解剖感染小鼠,无菌取小鼠肺、脾和肝脏组织;拍照记录肺、脾和肝脏等器官大体病变情况,取小鼠左肺、脾头及肝小叶于生物 安全柜内称重,依次经 2%稀硫酸溶液、生理盐水漂洗 30 s,1 ml 生理盐水温和 匀浆后进行 10倍倍比稀释,分别取 10-3,10-4和 10 -5 稀释液 50 µl 均匀涂布于中 性罗氏培养管内,37℃培养 4 周,计算相应的组织器官荷菌量。另取 10 -1稀释液 500 μl 接种于 BD BACTEC MGIT 960 培养系统,通过记录报阳时间进行结核菌的快速检测。 1.2.5 组织切片 HE染色与铁染色 小鼠各组织器官,10%中性福尔马林溶液固定 48 h。组织按长轴最大横切面修块、梯度乙醇脱水、石蜡包埋并切成 5 µm 厚度切片,HE 染色后扫描载玻片并保存为 NanoZoomer 数字病理图像,不同视野下拍照并进行组织病理学分析。铁染色组织切片脱蜡至水,切片入 Perls 染液浸染 20 min,蒸馏水充分冲洗切片5 min,入核固红染色液,淡染细胞核 10 min,自来水冲洗 5 s。常规脱水透明,中性树胶封固,晾干后拍照观察其病理形态改变及铁沉积程度。 1.3 统计学分析 SPSS16.0 进行统计学处理,结果以平均数±标准差表示。不同实验处理组之间差异比较采用单因素方差分析,P < 0.05 为差异有统计学意义。柱形图采用 GraphPad Prism 5 软件制作。 |
动物模型的评价与验证 | (一)模型的评价 本模型采用的评价主要采取以整体表观效度的评价方法,本模型分为铁过载模型和结核感染模型两部分。铁过载模型的核心指标铁过载小鼠外周血血清铁和铁蛋白水平随铁剂注射量增加而升高,转铁蛋白和可溶性转铁蛋白受体无明显变化。动物各脏器组织 HE与普鲁士蓝染色结果发现,铁过载动物各脏器均出现不同程度铁沉积,且高剂量铁剂引发小鼠肝肾损伤。 结核菌感染模型的核心指标是感染期的组织病变和荷菌量,铁过载小鼠感染结核菌后,铁过载动物肺脾肝组织结核性病变严重,且荷菌量较空白 Mtb 感染组增加,综合组织荷菌 |
保存方式 | 活体繁殖 |
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