Galetin7基因沉默小鼠模型

BALB/c Mouse

（1）将galectin-7CDNA序列输入网上的基因沉默片断选择软件，选择沉默的发夹DNA。DEFINITION  Mus musculus lectin, galactose binding, soluble 7 (Lgals7)CDNA

C A G C G A C T G G C C A C A T T G T GATGGAAAGGGAGGAGCTGAACCACTACCTTGCCTTTACTTAAGGTCCCCTCCCACAGCGACTGGCCACATTGTTGCTGTATTGCTGTGCCCGCCATGTCTGCTACCCAGCACAAGACCTCCCTGCCTCAGGGCGTCCGCGTGGGCACTGTCATGAGAATTCGAGGCATGGTCCCTGACCAGGCTGGCAGGTTCCATGTAAACCTGCTATGCGGTGAGGAGCAAGGAGCAGATGCCGCCTTGCACTTTAACCCGAGGCTGGACACTTCCGAGGTTGTCTTCAACACCAAAGAACAAGGCAAATGGGGCCGTGAGGAGCGAGGCACCGGCATCCCCTTCGAGCGTGGGCAGCCCTTTGAAGTGCTCCTCATCGCCACAGAGGAAGGCTTCAAGGCTGTGGTCGGGGATGACGAATATCTCCACTTCCACCACCGGATGCCGCCCGCGCGCGTGCGCTTGGTGGAGGTGGGCGGAGACGTGCAGCTGCATTCAGTGAAGATCTTCTAAGCAAGGACCCAAGGGCGTGGCGGGTAGGGGTGGGGGTGTAGGATCGCAGAGGAGGGTTTTGGATGGCGAATAAAGTGTAGCTGTAGTTCTG

（2）分别合成3个不同位置galectin-7CDNA的正义和反义发夹DNA。

（3）将正义和反义序列退火，并通过连接酶与基因沉默载体p-silencer5.1连接。

（4）通过酶切确定沉默载体构建完成

（5）通过细胞培养和基因沉默载体转染，检测不同发夹的基因沉默效率

基因沉默效率细胞水平上的Western检测

（6）选择沉默效果高的发夹，通过核基因注射把p-silencer5.1中的启动子和发夹基因转入小鼠的核基因（7）首建鼠仔代基因鉴定，利用PCR引物鉴定发夹基因是否转入。

基因沉默首建鼠PCR检测

上游引物5’ATCCTCCCTTTATCCAGC 3’

下游引物 5’ GAGGGCCTATTTCCCATG  3’

退火温度51度，产物大小392 BP

（8）首建鼠仔代Western Blot鉴定基因的沉默效果。

沉默鼠Western Blot检测