| 资源中文名称 | 帕金森疾病（PD）斑马鱼模型 |
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| 资源英文名称 | |
| 疾病概述 | 帕金森疾病是中老年人的慢性神经系统退行性疾病，发病年龄在 40－70 岁 之间。PD 发病与以下因素相关：1.脑老化，随人的增龄，黑质多巴胺能神经元 不断死亡，当 80％的神经元死亡时可出现 PD 症状。2. 具有遗传性，a-突触核蛋 白及 Parkin 等基因突变与少数家族性 PD 相关。3.环境因素，一些外源性或内源 性毒素可引起黑质纹状体神经元死亡，如海洛因吸食者出现 PD 样症状，后者被 证实含有神经毒素 MPTP。4. 其它疾病和外伤导致的脑神经损伤，如脑梗等脑 血管病变和创伤导致的脑神经元死亡。 |
| 实验动物背景信息 | 斑马鱼(Zebrafish, Danio rerio) AB 或 TU 野生型品系均可。 |
| 模型制作方法 | 1. 造模化合物 1-甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氢吡啶（MPTP）是一种神经毒素，常用 于制作帕金森病动物模型。 2. 实验动物 野生型斑马鱼 AB 或 TU 品系。斑马鱼饲养和管理均按照常规方法。饲养空 间温度 28-30°C。 3. 造模化合物处理 MPTP 为 Sigma (M0896) 产品，MPTP 母液用纯水制备，浓度为100 µM， 储存于－20 °C. MPTP工作液用饲养液稀释至50、100、200、500 µM。将斑马鱼幼体暴露于MPTP 工作液24小时，收集幼体，进行下一步处理。 4. RT-PCR检测PD相关基因转录水平 收集斑马鱼于 TRIzol reagent (Sigma).提取总 RNA，进行 RT-PCR 检测 PD 相关的基因表达水平。PCR 引物见表 1。 表 1. Primer pairs and parameters of PCR in the study
5. 原位RNA杂交 收集斑马鱼于4% paraformaldehyde固定。Th基因探针片段为PCR产物（表1）， 并被克隆到载体pGEM-T质粒上。探针的合成按照试剂盒(DIG RNA labeling kit (Roche Applied Science, 1175041)）说明制备th基因RNA杂交探针。按照操作程序 将斑马鱼样本与探针温育、检测、拍照。 6. 原位免疫荧光检测 按照常规程序，将斑马鱼幼体与TH蛋白单克隆抗体(Minipore, MAB318)温 育，然后用FITC-标记的二抗温育、洗涤，显微镜下检测、拍照。 7. Western blotting 用RIPA lysis kit (Applygen Technologies Inc., C1053)提取斑马鱼总蛋白，进 行SDS-PAGE、转膜，用PD相应蛋白的抗体和二抗进行检测。β-ACTIN抗体，mouse anti-human ACTB antibody (Zhongshan Goldbridge, TA09); 小鼠 anti-GAPDH mAb (Zhongshan Goldbridge, TA08); 兔anti-mouse TH monoclonal antibody (Minipore, MAB318); PINK1 (D8G3) 兔mAb antibody (CST, catalog no. 6946); Parkin mAb antibody (CST, catalog no. 4211); β-syn (Syn205) 小鼠mAb antibody (CST, catalog no. 2644)。 8. 斑马鱼行为学实验 幼体行为记录采用ZebraLab (法国Viewpoint, ZebraLab 3.3)仪器，幼体逐个放 入96-孔板，(1 fish/well). 记录运动距离、游泳持续时间、速度和游泳轨迹。每5 分钟记录一次数据。 |
| 动物模型的评价与验证 | |
| 保存方式 | |
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