D173L转基因小鼠模型

D5F173L转基因多巴胺小鼠模型。

背景品系为C57BL/6小鼠，属于动物界、脊索动物门、脊椎动物亚门、哺乳纲、啮齿目、鼠科、家鼠属、家鼠种的动物，1921年立特(Little)用艾比·拉特洛坡(Abby Lathrop)的小鼠株，雌鼠57号与雄鼠52号交配而得C57BL，1937年从C57BL分离出C57BL/6亚系培育而成。

由美国乔治敦大学Pedro A. Jose博士惠赠的pcDNA-h-D5F173L表达载体人D5F173L质粒，转化入大肠杆菌JM109，摇菌扩增后测序，测序结果经Blast分析，显示得到的pcDNA-D5-F173L与Genebank 中序列对比得到目的突变位点正确。用显微注射法将线性化的转基因载体注射到C57BL小鼠的受精卵中，用C57BL小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。转基因小鼠用碱裂解法提取基因组DNA。PCR法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。Western blot检测转基因小鼠肾组织中D5R的表达（图2）。

                    1        2       3        4       M

图2 Western Blotting 鉴定D5 F173L转基因小鼠D5受体蛋白在肾脏的表达

1:野生型对照小鼠，2:32号首建鼠的F1代小鼠，3:4号首建鼠的F1代小鼠，

4:16号首建鼠的F1代小鼠