高表达Fbxw11选择性剪接体的MLLAF9诱导的小鼠髓细胞白血病模型

SPF级6-8周龄鼠，C57BL/6J小鼠（CD45.2）， B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠（B6.SJL，CD45.1）。

1. 病毒准备

细胞：293T

表达载体：MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP，MSCV- Fbxw11 -IRES-BFP。

2. 实验动物

可使用SPF级别的6-8周龄鼠， C57BL/6J小鼠（CD45.2）， B6.SJL-PtprcaPepcb/BoyJ小鼠（B6.SJL，CD45.1）。

3. 细胞准备：

取B6.SJL小鼠的骨髓细胞，利用C-kit⁺磁珠，富集C-kit⁺造血干祖细胞

4. 病毒感染

富集的小鼠C-kit⁺造血干祖细胞，体外感染表达MSCV- MLL-AF9 -IRES-GFP的逆转录病毒，感染后培养48h。

5. 细胞回输

感染后的C-kit⁺造血干祖细胞利用流式细胞仪分选出GFP⁺的细胞，通过尾静脉注射到致死剂量照射的C57BL/6J小鼠体内，每周检测GFP⁺细胞的比例。

6. 病毒二次感染及回输

当检测到小鼠外周血GFP⁺细胞的比例超过50%，处死小鼠，取小鼠骨髓细胞，分选出GFP⁺细胞，体外感染表达MSCV- Fbxw11 -IRES-BFP的逆转录病毒，感染后培养48h, 通过尾静脉注射到C57BL/6J小鼠体内，每周检测GFP⁺ BFP⁺细胞的比例。

7. 模型分析指标

1. 症状观察

细胞回输后小鼠症状表现为：竖毛、弓背。

2. 流式检测

在细胞回输后的一周后，每周检测外周血GFP⁺ BFP⁺细胞的比例，有出现GFP⁺ BFP⁺细胞，即为模型成功。