Krt75tm1Der基因敲入小鼠模型

1、模型制作

该模型受赠于Dennis R. Roop实验室 ，现将模型 的制作方法介绍如下：

小鼠的Krt75蛋白与人的Krt6A蛋白的N端的氨基酸序列具有高度的同源性，即小鼠的Krt75与人的Krt6A相对应。人的Krt6A的显性位点的失活突变是造成先天性甲肥厚（Pachyonychia Congenita，PC）最常见的突变，PC是另一种少见的甲肥厚性遗传性皮肤病，于1906年由Jadassohn和Lewandowsky首先命名。目前已经确定其中频率最高的突变是172密码子的却是突变，该密码子编码一个天冬酰胺（N）。已有研究显示该突变造成的缺陷导致Krt6a的合成出现障碍，从而干扰蛋白质组装成角蛋白骨架的功能。因此，我们设计了一个删除N159(N159del) 从而导致Krt75蛋白出现一个显性位点的失活突变(Krt75tm1Der)。

构建小鼠Krt75 N159del突变表达载体，这一突变等同于人KRT6A N172del突变。向重组的ES细胞电转一个cre表达载体。得到的目的ES细胞克隆注射入C57BL/6J小鼠囊胚中。得到的嵌合体小鼠与C57BL/6J回交，得到的携带有目的等位基因（t/Krt75tm1Der），鼠尾DNA用于PCR检测。杂合子小鼠（t/Krt75tm1Der）互交后得到纯合子仔鼠（Krt75tm1Der/Krt75tm1Der）。（图1）

图1：Krt75tm1Der基因敲入小鼠的建立