H5N1禽流感病毒气溶胶吸入感染雪貂模型

雪貂呼吸道解剖结构上下呼吸道分腔明显，受体分布与人极为接近，是迄今为止最为敏感的流感病毒感染动物模型。它对人流感病毒高度易感，病毒不经适应即能使雪貂致病，并易传播给雪貂和人。在自然条件下，雪貂一般也是通过呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的发病过程和机体反应也与人体相似。雪貂除对人流感病毒高度易感外，对禽流感、猪流感病毒也十分敏感，且感染后出现典型症状。

病毒株为A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011和A/Vietnam/1194/2004禽流感病毒，经血凝抑制（HI）实验，筛选出6月龄以下对当下流行的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9亚型流感病毒相应血清抗体均为阴性的去势雪貂。为了使动物适应并降低应激反应，所有雪貂均在感染前一周进行体温芯片的皮下植入和实验室适应（使用扫描仪监测体温，BMDS, USA）。感染组通过肌肉注射盐酸塞拉嗪对雪貂进行麻醉，轻度麻醉后感染组每只雪貂经鼻接种病毒。传播实验是在笼子中进行的，该笼子旨在防止动物之间的直接接触，但允许已接种的雪貂与相邻的幼稚雪貂之间保持气流。两组三只雪貂经鼻内接种10 ⁴ TCID ₅₀病毒400uL；一组接种了A/wild bird/Hong Kong/07035-1/2011病毒，另一组接种了A/Vietnam/1194/2004病毒。在感染后第24小时，将每只接种过的动物和幼稚的雪貂分别饲养在传播笼中，以测试病毒的传播能力。观察所有动物的临床体征，每天称重作为疾病的指标。分别在感染后第1、3、5、7和9天或暴露后从已接种和未接种过的动物收集鼻拭子和咽拭子，并转移至1 ml PBS中。通过在MDCK细胞中的终点滴定确定病毒滴度。