肠道病毒71人清道夫受体B2（hSCARB2）转基因动物模型
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肠道病毒71人清道夫受体B2（hSCARB2）转基因动物模型项目报价？ 解决方案？ 检测周期？ 样品要求？(不接受个人委托) |
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发布时间：2023-03-01 14:31:27
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| 资源中文名称 | 肠道病毒71人清道夫受体B2（hSCARB2）转基因动物模型 |
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| 资源英文名称 | |
| 疾病概述 | 人肠道病毒71型（EV71）是微核糖核酸病毒科肠病毒属肠病毒种A型RNA病毒， 1969年首次在加利福尼亚神经异常的病人体内分离并鉴定。EV71被认为是婴幼儿手足口病(HFMD)的主要病原体之一。该病毒感染偶尔伴随严重的并发症，包括脑干脑炎、无菌性脑膜炎、肺水肿或肺出血、急性弛缓性麻痹和心力衰竭。最近几十年，EV71感染引起的手足口病疫情在世界范围内大爆发，目前主要集中于亚太地区。中国大陆的EV71病毒感染始见于1987年冬季湖北省HFMD的流行，自1999年以来，我国广东、福建、上海、重庆等地区也报告了局部流行的EV71感染，与1998年台湾地区报道120,000例爆发手足口病，其中有78例死亡不同，大陆EV71引起的HFMD和神经系统症状较轻。以往研究认为人脊髓和脑干是EV71感染的靶标，但其感染机制和致病机制尚不明确。 2009年日本学者首次利用细胞实验鉴定了EV71的两种人受体蛋白，分别为P选择素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand-1，PSGL-1)和人清道夫受体B2（SCARB2）。通过建立表达PSGl-1的转基因小鼠，我们证实人PSGL-1有一定的促进EV71感染转基因小鼠的功能。为进一步在体内证实人SCARB2的受体功能，以期改良现有的EV71感染小鼠模型，我们通过建立表达人SCARB2基因的转基因小鼠，在体内验证了该蛋白的受体功能。 |
| 实验动物背景信息 | SCARB2转基因动物模型，无特定病原体(specific-pathogen free，SPF) ICR小鼠，6周龄，雌性，体重18-20 g。 背景品系为ICR封闭群小鼠， Hauschka用Swiss小鼠群以多产为目标，进行选育，以后美国癌症研究所（Institute of Cancer Research）分送各国饲养实验，各国称为ICR。 |
| 模型制作方法 | pCMV6-XL5-h-SCARB2质粒购自美国Origene公司（Clone ID NM_002257）。EcoR I和Xho I酶切回收h-SCARB2片段，并克隆入pCDNA3.1(+)质粒中巨细胞瘤病毒（CMV）启动子下游，构建全身表达人SCARB2的载体。转基因载体经测序验证后，用Pvu I将载体线性化，Sephedex G50柱纯化。将DNA浓度调整至5 ng/uL，用显微注射法将DNA注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，用ICR小鼠作假孕受体，制备转基因小鼠。经鼠尾DNA PCR对首建鼠的基因型进行鉴定，得到阳性首建鼠3只（图1A）。随后，用逆转录PCR分析了首建鼠F1代组织中目的基因的表达情况，发现人SCARB2主要在转基因小鼠的骨骼肌和脑组织中表达（图1B）。随后，分别用Western Blot和免疫组化分析了人SCARB2蛋白在脑和骨骼肌组织中的表达情况。由于人SCARB2与小鼠SCARB2同源性较高，存在抗体交叉结合现象。Western Blot发现转基因小鼠脑和骨骼肌组织中SCARB2蛋白表达量高于同窝阴性（图1C-1D）。免疫组化发现SCARB2蛋白主要分布于转基因小鼠的骨骼肌和脑组织中（图2A-2B），该结果表明成功建立了脑和肌肉组织表达人SCARB2蛋白的转基因小鼠。
Note: M: DNA molecular weight standard; Lane1-15:Transgenic mouse line; NTG: Negative littermates; TG: Transgenic mice; A:Transgenic mice lines identification by PCR using the tail genomic DNA as template; B: Reverse-transcriptase PCR analysis the human SCARB2 gene expression in tissues of Tg mice; C: Western blot detected the expression of human SCARB2 protein synthesis in brain of Tg mice; D: Western blot detected the expression of human SCARB2 protein synthesis in muscle of Tg mice. The data were normalized to GAPDH expression Fig.1 Establishment and identification of the transgenic mice expressing human SCARB2.
注： NTG：同窝阴性小鼠；TG：转基因小鼠； A-B：21日龄小鼠脑和肌肉的免疫组；SCARB2蛋白如黑色箭头所示。放大倍数为：100×。 图2 SCARB2转基因小鼠的免疫组化鉴定 Note: NTG: Negative littermates; TG: transgenic mice; A-B: immunohistochemical analysis of brain and muscle of 21-day TG mice and the positions of SCARB2 protein are denoted with black arrows, respectively. Magnification: 100×. Fig.2 Immunohistochemical identification of the SCARB2 transgenic mice |
| 动物模型的评价与验证 | |
| 保存方式 | 胚胎冷冻 |
| 更多相关 | 动物模型制备 |
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