人宫颈癌Hela绿色荧光标记细胞BALB/c裸小鼠肿瘤模型(HelaeGFP)模型
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发布时间:2024-05-21 08:15:32 更新时间:2024-10-29 18:09:20
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资源中文名称 | 人宫颈癌Hela绿色荧光标记细胞BALB/c裸小鼠肿瘤模型(Hela-eGFP) |
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资源英文名称 | |
疾病概述 | 宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。原位癌高发年龄为30~35岁,浸润癌为45~55岁,近年来其发病有年轻化的趋势。常见有鳞癌、腺癌和腺鳞癌三种类型。(1)鳞癌:按照组织学分化分为Ⅲ级。Ⅰ级为高分化鳞癌,Ⅱ级为中分化鳞癌(非角化性大细胞型),Ⅲ级为低分化鳞癌(小细胞型),多为未分化小细胞。(2)腺癌:占宫颈癌15%~20%。主要组织学类型有2种。①黏液腺癌:最常见,来源于宫颈管柱状黏液细胞,镜下见腺体结构,腺上皮细胞增生呈多层,异型性增生明显,见核分裂象,癌细胞呈乳突状突入腺腔。可分为高、中、低分化腺癌。②恶性腺瘤:又称微偏腺癌,属高分化宫颈管黏膜腺癌。癌性腺体多,大小不一,形态多变,呈点状突起伸入人宫颈间质深层,腺上皮细胞无异型性,常有淋巴结转移。(3)腺鳞癌:占宫颈癌的3%~5%。是由储备细胞同时向腺细胞和鳞状细胞分化发展而形成。癌组织中含有腺癌和鳞癌两种成分。 |
实验动物背景信息 | Hela细胞是典型的永生化细胞系,是人上皮细胞,源自一名美国妇女的子宫颈癌细胞,此细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒 (Human Papillom avirus 18或HPV 18 )转型成癌细胞的,而且和正常子宫颈癌细胞有许多不同,此细胞显角蛋白免疫沉淀染色阳性,包含HPV-18序列,有正常水平的pRB表达和p53的低水平表达。该细胞是一种体外培养环境中仍具有接触抑制行为的贴壁细胞,然而接触抑制行为的丧失是细胞癌变的表现之一,即细胞能够在实验动物中成瘤,并且可成多层生长。因此,Hela细胞在实验动物中不具有致瘤性,但是病毒致癌基因的转入能够使其具备实验动物成瘤性。Hela细胞具有82条染色体,其中12号染色体4个拷贝数,6、8及17号染色体3个拷贝数。 无胸腺裸鼠(Nude Mouse,简称裸鼠)目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。经过世界各国实验动物遗传育种学家的努力,目前已将nu基因导入不同近交系动物,成为系列动物模型,仅小鼠模型一种,已建立了二十余种近交系裸鼠。由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植。因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。根据T.Fogh等1979~1980年的报导,已有150株人的瘤细胞和人体原发癌移植于裸鼠获得成功,目前已成功地将人结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百分比(35.7%)的良好生长,并可传代。若用已建株的人体肿瘤组织培养细胞作移植材料,接种后的成活率更高(41%)。 本实验中所用鼠种BALB/c-nu/nu,系1973年从丹麦引入日本中央实验动物所研究。继续培育三年后,交由日本CLEA株式会社进行生产。1980年由CLEA引入。雄鼠是无胸腺裸鼠(BALB/c-nu/nu),雌鼠是有胸腺的杂合小鼠(BALB/c-nu/+)。采用BALB/c-nu/+♀与BALB/c-nu/nu♂随机交配法进行繁殖,已取得较好成果,裸鼠的生产性能良好:受胎率达81.5%,平均产仔率8.1只/窝,平均产裸仔率3.99只/窝,每窝平均成活3.62只仔鼠,9周龄仔鼠成活率100%,其主要项目数据与日本中央实验动物研究所(CLEA)和英国实验动物中心(LAC)发表的材料基本一致。 |
模型制作方法 | 模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15-18g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:Hela细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin-promotor-eGFP 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent 转染Hela细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达GFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养。 图1 表达GFP的Hela细胞株(200×) 稳定高表达GFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图1)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。每周观察一次,裸鼠麻醉后放入活体荧光系统摄像,Slide Book 4.0软件进行分析 4.5肿瘤体积测定:在接种的14、21、28和35d,分别用游标卡尺测量肿瘤块3个互相垂直直径A、B、C,代入下式计算肿瘤块的体积V:V=1/6πABC(V为体积,A、B、C为瘤体的3个互相垂直的直径),并绘制肿瘤的生长曲线。 4.6肿瘤组织的HE和TUNEL染色:肿瘤生长5周后,剥取出移植瘤,制成石蜡切片并进行HE和TUNEL染色 |
动物模型的评价与验证 | |
保存方式 | 冷冻 |
更多相关 | 动物模型制备 |
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