非小细胞肺腺癌NCIH1299绿色荧光标记细胞BALB/c裸小鼠肿瘤模型
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发布时间:2024-05-21 08:15:32 更新时间:2024-10-29 18:09:20
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资源中文名称 | 非小细胞肺腺癌NCI-H1299绿色荧光标记细胞BALB/c裸小鼠肿瘤模型 |
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资源英文名称 | NCI-H1299-eGFP |
疾病概述 | 肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌,与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%,约75%的患者发现时已处于中晚期,5年内生存率很低。 |
实验动物背景信息 | H1299非小细胞肺腺癌细胞,又称为NCI-H1299或CRL-5803,是一种非小细胞肺癌细胞株,来源于肺癌的淋巴结转移灶,在生物研究中有着广泛的应用。与其他永生细胞系不同,H1299细胞系不能被明确的鉴定区分。该细胞纯合缺失TP53基因,从而导致该细胞系不具有肿瘤抑制因子p53蛋白的表达,而p53恰恰被认为是肿瘤细胞无限增殖潜能的表现。报道称,NCI-H1299细胞系表达并分泌神经调节肽B(NMB)而非胃泌素释放肽(GRP)。 无胸腺裸鼠(Nude Mouse,简称裸鼠)目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。经过世界各国实验动物遗传育种学家的努力,目前已将nu基因导入不同近交系动物,成为系列动物模型,仅小鼠模型一种,已建立了二十余种近交系裸鼠。由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植。因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。根据T.Fogh等1979~1980年的报导,已有150株人的瘤细胞和人体原发癌移植于裸鼠获得成功,目前已成功地将人结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百分比(35.7%)的良好生长,并可传代。若用已建株的人体肿瘤组织培养细胞作移植材料,接种后的成活率更高(41%)。 本实验中所用鼠种BALB/c-nu/nu,系1973年从丹麦引入日本中央实验动物所研究。继续培育三年后,交由日本CLEA株式会社进行生产。1980年由CLEA引入。雄鼠是无胸腺裸鼠(BALB/c-nu/nu),雌鼠是有胸腺的杂合小鼠(BALB/c-nu/+)。采用BALB/c-nu/+♀与BALB/c-nu/nu♂随机交配法进行繁殖,已取得较好成果,裸鼠的生产性能良好:受胎率达81.5%,平均产仔率8.1只/窝,平均产裸仔率3.99只/窝,每窝平均成活3.62只仔鼠,9周龄仔鼠成活率100%,其主要项目数据与日本中央实验动物研究所(CLEA)和英国实验动物中心(LAC)发表的材料基本一致。 |
模型制作方法 | 模型制作采用BALB/cA-nu小鼠,鼠龄5周,体重15-18g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。 4.1细胞培养:NCI-H1299肺癌细胞为本实验室冻存 4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-eGFP 图1绿色荧光表达载体的构建 4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染NCI-H1299细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达GFP的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。 图2绿色荧光标记的NCI-H1299细胞系(200×) 稳定高表达GFP的细胞,在荧光显微镜下均呈强荧光,并且荧光较均匀的分布于整个细胞内。单克隆GFP细胞在无G418筛选压力下,传代数次后仍能稳定高水平表达GFP(图2)。细胞形态和未转染细胞无明显区别。 4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠皮下接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。 |
动物模型的评价与验证 | |
保存方式 | 冷冻 |
更多相关 | 动物模型制备 |
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