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最小抑菌浓度测定试验-营养肉汤稀释法检测

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发布时间：2025-05-15 11:13:53 更新时间：2025-05-28 00:24:30

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

最小抑菌浓度测定试验-营养肉汤稀释法检测概述

最小抑菌浓度（Mium Inhibitory Concentration, MIC）是评价抗菌药物对微生物抑制效果的关键指标，广泛应用于临床药敏试验、新药研发及抗菌机制研究等领域。营养肉汤稀释法作为MIC测定的经典方法之一，通过将抗菌药物在液体培养基中梯度稀释并与目标菌株共培养，最终确定抑制细菌生长的最低药物浓度。该方法操作简便、结果直观，且符合国际标准化要求，适用于需氧菌、厌氧菌及真菌的MIC测定。

检测项目

本试验的核心检测项目包括：
1. 目标微生物（如细菌或真菌）对不同抗菌药物的敏感性；
2. 抗菌药物的体外抑菌效力分级（敏感、中介、耐药）；
3. 药物浓度梯度对微生物生长的抑制作用曲线。

检测仪器与材料

实验所需主要仪器和材料包括：
1. 微量稀释板：用于梯度稀释抗菌药物的96孔板；
2. 分光光度计或浊度仪：测定菌液浓度，确保接种菌量标准化（通常0.5麦氏浊度）；
3. 恒温培养箱：提供适宜微生物生长的温度环境（如35±2℃）；
4. 无菌移液器及吸头：精确转移药液和菌液；
5. 营养肉汤培养基（如Mueller-Hinton Broth）及待测抗菌药物原液。

检测方法

实验步骤如下：
1. 药物稀释：将抗菌药物用肉汤培养基进行倍比稀释（如256 μg/mL至0.125 μg/mL），加入微量板各孔；
2. 菌液制备：挑取纯培养菌落配制标准浓度菌悬液（通常1×10⁶ CFU/mL）；
3. 接种与培养：每孔加入定量菌液，混匀后置于恒温箱培养16-24小时；
4. 结果判读：肉眼或酶标仪观察孔内浊度变化，无可见生长的最低药物浓度即为MIC值。

检测标准与质量控制

为确保结果可靠性，需遵循以下标准：
1. CLSI指南（Clinical and Laboratory s Institute）：根据M07系列文件规范操作流程；
2. EUCAST标准（European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing）：明确不同菌种的折点判定标准；
3. 质控菌株验证：使用ATCC标准菌株（如大肠埃希菌ATCC 25922）进行平行试验；
4. 重复性要求：同一药物-菌株组合需重复测定3次，结果偏差不超过1个稀释度。

营养肉汤稀释法通过严格的操作流程和标准化质控，能够为临床合理用药和新药评价提供科学依据，是微生物药敏试验的基石方法之一。