sps内源基因检测
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发布时间:2025-05-15 15:52:40 更新时间:2025-05-14 15:52:41
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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SPS(物种特异性内源基因)检测是生物基因检测领域的重要研究方向,主要用于验证样本的物种来源、检测样本质量以及评估实验过程中是否存在污染或抑制物干扰。内源基因是指生物体内固有的、具有物种特异性的基因片段,例如植物中的叶绿体基因或动物中的线粒体基因。在转基因检测、食品安全评估及法医鉴定等领域,SPS内源基因检测通过靶向这些特有序列,确保检测结果的准确性和可靠性。例如,在转基因作物检测中,内源基因可作为阳性对照,判断样本是否适合进行后续目标基因分析。
SPS内源基因检测的核心项目包括:
1. 物种特异性内源基因筛选:针对不同物种(如玉米、大豆、水稻等)设计特异性引物,验证其唯一性;
2. 基因表达稳定性分析:评估内源基因在不同组织或环境中的表达水平;
3. 抑制物干扰检测:通过内源基因扩增效率判断样本中是否存在PCR抑制物;
4. 定量检测:结合标准曲线对目标基因进行相对定量分析。
完成SPS检测需依赖以下关键仪器:
- 实时荧光定量PCR仪(如ABI 7500、Bio-Rad CFX):用于高灵敏度扩增和实时监测基因表达;
- 核酸提取仪(如MagCore HF16):实现自动化样本DNA/RNA纯化;
- 电泳系统:验证扩增产物大小及特异性;
- 测序仪(如Illumina MiSeq):用于内源基因序列确认及数据库比对。
检测流程分为四个关键步骤:
1. 核酸提取与质控:采用CTAB法或试剂盒提取DNA,通过分光光度计检测纯度(OD260/280≥1.8);
2. 引物设计与验证:基于NCBI数据库设计物种特异性引物,并通过BLAST比对排除非特异性结合;
3. PCR扩增:设置梯度退火温度优化反应条件,同时加入阴性/阳性对照;
4. 结果分析:通过熔解曲线分析扩增特异性,Ct值≤35视为有效检测。
SPS检测需符合以下国际与国内标准:
- ISO 21569:2005《分子生物学检测方法验证规范》;
- GB/T 19495.4-2018《转基因产品检测 核酸定量检测方法》;
- SN/T 1194-2020《植物及其产品中转基因成分检测 抽样和制样方法》;
- AOAC Official Method 2004.04:针对玉米内源基因Adh1的检测指南。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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