您现在的位置：首页 > 检测项目 > 其他检测

病毒性出血性败血症病毒核酸检测

1对1客服专属服务，免费制定检测方案，15分钟极速响应

可选形式：电子报告纸质报告

可选语言：中文报告英文报告

发布时间：2025-05-15 23:55:05 更新时间：2025-06-09 21:56:35

点击：0

作者：中科光析科学技术研究所检测中心

病毒性出血性败血症病毒核酸检测的背景与意义

病毒性出血性败血症（Viral Hemorrhagic Septicemia, VHS）是由弹状病毒科（Rhabdoviridae）的病毒性出血性败血症病毒（VHSV）引起的一种高致死性鱼类传染性疾病，主要影响鲑科鱼类、鲈科鱼类及多种冷水性经济鱼类。该病以全身性出血、内脏器官坏死和急性死亡为特征，对全球水产养殖业造成巨大经济损失。由于VHSV的高传染性和变异性，早期、准确的核酸检测成为疾病防控的关键环节。通过分子生物学技术直接检测病毒核酸，能够快速确定感染状态，为疫病监测、检疫隔离和防控策略制定提供科学依据。

检测项目

VHSV核酸检测的核心项目包括：
1. VHSV特异性核酸片段检测：针对病毒基因组中高度保守的区域（如N蛋白基因、G蛋白基因）进行靶向扩增；
2. 病毒载量定量分析：通过实时荧光定量PCR技术测定样本中病毒RNA的拷贝数；
3. 基因分型检测：分析病毒基因序列差异，确定毒株的亚型（如基因型Ⅰ-Ⅳ）及其地理来源；
4. 抗药性基因筛查：针对可能出现的基因突变位点进行监测。

检测仪器

VHSV核酸检测需依托以下核心设备：
- 实时荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96）：用于核酸扩增与实时检测；
- 核酸提取仪（如QIAcube、MagMAX系统）：实现样本RNA的高效纯化；
- 电泳仪及凝胶成像系统：用于常规PCR产物的定性分析；
- 超微量分光光度计（如NanoDrop）：评估核酸纯度与浓度；
- 高通量测序平台（如Illumina MiSeq）：用于全基因组测序分析；
- 生物安全柜：确保实验过程符合生物安全二级（BSL-2）标准。

检测方法

检测流程遵循以下标准化操作：
1. 样本采集与处理：取病鱼肾脏、脾脏或脑组织，按1:10比例加入含RNase抑制剂的PBS匀浆，离心取上清；
2. RNA提取：采用TRIzol法或磁珠法提取总RNA，DNase I消化去除基因组DNA污染；
3. 逆转录PCR：使用随机引物或特异性引物合成cDNA；
4. 实时荧光定量PCR：采用TaqMan探针法，针对VHSV的N基因设计引物（如F:5'-CGTCAACATGGTCAAGTTCA-3'，R:5'-GTCACACCAGTCCCATT-3'），设置阳性对照和空白对照；
5. 结果判读：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型判定为阳性，通过标准曲线计算病毒载量；
6. 确认实验：阳性样本需进行核酸测序或巢式PCR验证。

检测标准

VHSV核酸检测需严格遵循以下国际与国内标准：
- OIE《水生动物疾病诊断手册》（2023版）第2.3.8章规定；
- GB/T 36193-2018《鱼类病毒性出血性败血症诊断技术》；
- SN/T 1675-2013《进出境鱼类病毒性出血性败血症检疫规范》；
- ISO 20370:2017《鱼类病毒核酸检测通用要求》；
- 美国CDC鱼类病毒检测指南（2022修订版）。

结论

VHSV核酸检测通过分子靶向技术实现了对病毒的直接、敏感检测，其标准化操作流程和高特异性引物设计可有效区分VHSV与其他相关弹状病毒（如IHNV）。随着CRISPR快速检测技术的应用，现场即时检测（POCT）将成为未来发展的重点方向，为水产养殖业的生物安全提供更强保障。检测过程中需严格遵循生物安全规范，定期进行实验室能力验证，确保检测结果的准确性与可溯源性。