猪繁殖和呼吸综合征病毒核酸检测
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发布时间:2025-05-16 03:10:35 更新时间:2025-05-15 03:10:37
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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猪繁殖和呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的严重传染性疾病,以母猪繁殖障碍(流产、死胎)和仔猪呼吸道疾病为特征,对全球养猪业造成巨大经济损失。核酸检测作为PRRSV诊断的核心技术,具有灵敏度高、特异性强、可早期检测等优势,尤其在病毒变异株监测、疫情防控及疫苗效果评估中发挥关键作用。通过核酸检测,可快速确定感染状态,为临床治疗和生物安全措施提供科学依据。
PRRSV核酸检测的主要目标包括:
1. 病毒RNA检测:通过提取临床样本(如血清、肺组织、精液或唾液)中的病毒RNA,验证PRRSV的存在。
2. 基因分型:区分欧洲型(Type 1)和北美型(Type 2)毒株,指导疫苗选择及流行病学追踪。
3. 病毒载量定量:评估感染程度及病程进展,辅助判断治疗效果。
4. 变异株筛查:针对高致病性毒株(如HP-PRRSV)或重组毒株进行特异性检测。
PRRSV核酸检测需依赖以下核心仪器:
1. 核酸提取仪:自动化提取样本中的病毒RNA(如Qiagen QIAcube、MagNA Pure系列)。
2. 实时荧光定量PCR仪:用于qRT-PCR检测(如ABI 7500、Bio-Rad CFX96)。
3. 普通PCR仪:适用于常规RT-PCR扩增。
4. 电泳系统:验证PCR产物大小(如凝胶成像系统)。
5. 超低温冰箱:保存RNA样本及试剂(-80℃)。
PRRSV核酸检测常用技术包括:
1. RT-PCR:通过逆转录酶将RNA转化为cDNA后进行扩增,结合电泳分析结果,适用于基础检测。
2. 实时荧光定量PCR(qRT-PCR):利用探针法(如TaqMan)或染料法(SYBR Green)实时监测扩增过程,兼具定性和定量功能,灵敏度可达101-102 copies/μL。
3. 多重PCR:同时检测PRRSV不同基因型或与其他病原(如CSFV、PCV2)联合检测。
4. 数字PCR(dPCR):绝对定量病毒载量,适用于低浓度样本或复杂基质检测。
PRRSV核酸检测需遵循以下标准:
1. 国家标准:GB/T 35911-2018《猪繁殖与呼吸综合征诊断技术》明确RT-PCR和实时荧光PCR的操作流程及判定标准。
2. 国际标准:参考OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中PRRS章节的核酸检测指南。
3. 质控要求:实验需设立阴性对照、阳性对照及内参基因(如β-actin),确保结果可靠性。
4. 生物安全规范:按BSL-2级实验室要求处理感染性样本,防止气溶胶污染。
PRRSV核酸检测技术的精准应用,不仅能够实现早期诊断和精准分型,还可为疫苗研发和疫情动态监测提供数据支持。实验室需结合临床需求选择适宜方法,并严格遵循标准化操作流程,以保障检测结果的准确性和可重复性。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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