猪支原体肺炎病原检测
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发布时间:2025-05-19 12:09:51 更新时间:2025-06-09 22:26:33
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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猪支原体肺炎(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)是猪呼吸道疾病的主要病原之一,可导致猪群出现慢性呼吸道症状、生长迟缓和饲料转化率下降,严重时引发混合感染,造成重大经济损失。病原检测是防控该病的关键环节,通过快速、准确的检测手段,可及时诊断疫情、评估疫苗效果并制定科学的防控策略。本文将从检测项目、检测仪器、检测方法及检测标准等方面,系统阐述猪支原体肺炎病原检测的技术要点。
猪支原体肺炎的检测项目主要包括以下几类:
1. 病原分离培养:通过采集病猪的肺组织、气管拭子或支气管肺泡灌洗液,在专用培养基中进行支原体培养;
2. 抗体检测:通过血清学方法(如ELISA、间接血凝试验)检测猪群中特异性抗体水平;
3. 分子生物学检测:采用PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)或基因测序技术直接检测病原核酸;
4. 病理组织学检查:对病变肺组织进行切片染色,观察特征性病理变化。
常用检测仪器包括:
- PCR仪:用于核酸扩增,检测Mhp特异性基因片段(如P36、P46基因);
- 荧光显微镜:观察免疫荧光标记的病原或抗体复合物;
- 酶标仪:用于ELISA检测中的光密度值读取;
- 细胞培养箱:提供支原体分离所需的恒温、高湿度环境;
- 电泳仪:验证PCR产物的特异性。
主要检测方法及流程如下:
1. PCR检测法:
- 提取样本DNA,设计Mhp特异性引物;
- 进行PCR扩增(通常为35-40个循环);
- 通过电泳或荧光信号判断结果。
2. ELISA法:
- 将灭活抗原包被于酶标板;
- 加入待测血清,孵育后洗涤;
- 加入酶标二抗显色,测定OD值判定抗体效价。
3. 分离培养法:
- 使用改良Friis培养基,在37℃、5% CO₂条件下培养2-4周;
- 观察培养基颜色变化及菌落形态。
国内外常用检测标准包括:
- 国家标准:GB/T 35911-2018《猪肺炎支原体PCR检测方法》;
- 行业标准:NY/T 541-2016《动物疫病诊断技术规范》;
- 国际参考:OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》中Mhp检测指南;
- 诊断判读:PCR检测Ct值≤35判定为阳性;ELISA检测S/P值≥0.4视为抗体阳性。
通过规范的检测流程和标准化操作,可显著提高猪支原体肺炎的诊断准确性,为疫病防控提供可靠依据。建议养殖场结合临床表现,定期开展病原监测与抗体水平评估,建立科学的生物安全体系。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
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