马传染性贫血病抗体检测
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发布时间:2025-05-19 12:28:43 更新时间:2025-06-09 22:26:42
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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马传染性贫血病(Equine Infectious Anemia, EIA)是由马传染性贫血病毒(EIAV)引起的马属动物慢性传染病,具有高度接触传播性和致死性。该病主要通过蚊虫叮咬、血液污染或共用注射器等途径传播,全球范围内对马产业构成严重威胁。抗体检测是诊断EIA的核心手段,能够识别感染马匹体内产生的特异性抗体,为疫情监测、检疫隔离和净化群体提供科学依据。早期、准确的抗体检测不仅能控制疾病扩散,还可避免不必要的经济损失。
马传染性贫血病抗体检测的主要项目包括: 1. 血清抗体筛查检测:通过检测血清中的EIAV抗体,初步判断感染状态; 2. 免疫印迹(Western Blot)确诊试验:验证筛查阳性样本的特异性抗体; 3. 病毒核酸检测(PCR):辅助诊断急性感染期或抗体未产生时的病毒携带状态; 4. 琼脂免疫扩散试验(AGID):国际通用的EIA诊断金标准方法。
常用检测仪器包括: 1. 酶标仪(ELISA Reader):用于酶联免疫吸附试验(ELISA)的吸光度测定; 2. PCR扩增仪:进行病毒核酸的扩增与定性分析; 3. 电泳系统:用于Western Blot和AGID试验中的蛋白分离与显色; 4. 荧光显微镜:观察免疫荧光试验(IFA)中的抗体结合反应; 5. 高速离心机:处理血液样本并分离血清。
主要检测方法及技术原理: 1. AGID(琼脂免疫扩散试验):利用抗原与抗体在琼脂凝胶中扩散形成沉淀线,特异性强但耗时较长; 2. ELISA(酶联免疫吸附试验):通过酶标记的二抗显色反应定量检测抗体,灵敏度高且适合批量筛查; 3. 免疫层析试纸条:快速检测现场使用,15分钟内获得结果,适用于初筛; 4. 实时荧光定量PCR:检测病毒RNA,用于早期感染或免疫抑制状态的辅助诊断; 5. 免疫印迹法:通过电泳分离病毒蛋白并与抗体结合,作为确诊试验。
国际与国内主要检测标准包括: 1. OIE《陆生动物诊断试验手册》:规定AGID为法定确诊方法,ELISA可作为初筛; 2. GB/T 22915-2008(中国国家标准):详细规范EIA的AGID试验操作流程及结果判定; 3. 美国农业部(USDA)认证标准:要求ELISA试剂盒的灵敏度和特异性分别≥99%和≥98%; 4. ISO/IEC 17025:实验室需通过质量管理体系认证,确保检测过程的可追溯性; 5. 生物安全二级(BSL-2)要求:处理感染性样本时需遵循生物安全防护规范。
检测过程中需设置阳性对照、阴性对照和空白对照,排除交叉反应与非特异性干扰。AGID试验中若出现清晰沉淀线判为阳性,ELISA结果需根据临界值(Cut-off值)计算S/P比值。确诊需结合多种方法,避免因疫苗免疫或非特异性反应导致假阳性。定期参与国际能力验证(如OIE参考实验室比对)是保证检测准确性的关键。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
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