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牛白细胞黏附缺陷征检测

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发布时间：2025-05-29 05:51:06 更新时间：2025-05-28 05:51:07

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

牛白细胞黏附缺陷征（BLAD）及其检测意义

牛白细胞黏附缺陷征（Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency, BLAD）是一种由基因突变引起的遗传性疾病，主要影响荷斯坦牛等乳用牛品种。该疾病会导致白细胞（尤其是中性粒细胞）表面黏附分子CD18表达异常，进而削弱免疫系统功能，使患病牛易受细菌和真菌感染，表现为反复发热、生长迟缓、伤口愈合困难等症状。BLAD具有隐性遗传特征，携带单一突变基因的牛（杂合子）通常无症状，但若双亲均为携带者，后代有25%概率发病。由于BLAD对养殖业造成的经济损失显著，通过科学检测筛选携带者并优化育种策略，成为预防该病传播的核心手段。

检测项目与核心指标

BLAD检测的核心目标是鉴定牛CD18基因中特定的点突变（如D128G突变）。主要检测项目包括：
1. 基因型分析：通过检测CD18基因序列，确认是否存在已知致病突变；
2. 白细胞功能评估：通过体外实验观察白细胞黏附、迁移能力；
3. 携带者筛查：针对繁殖种群进行杂合子识别，避免隐性基因传递。

常用检测仪器与技术

现代BLAD检测依赖于分子生物学技术和精密仪器，主要包括：
- 实时荧光定量PCR仪（qPCR）：用于快速扩增目标基因片段并检测突变；
- 基因测序仪：如Sanger测序或二代测序（NGS），用于精确解析CD18基因序列；
- 凝胶电泳系统：配合限制性内切酶（如TaqⅠ）进行RFLP（限制性片段长度多态性）分析；
- 流式细胞仪：通过荧光标记抗体定量检测白细胞表面CD18蛋白表达水平。

主流检测方法详解

1. PCR-RFLP法：
提取牛血液或组织DNA后，通过特异性引物扩增CD18基因目标区域，利用TaqⅠ酶切消化PCR产物。突变型基因会产生特定长度的酶切片段，通过电泳图谱即可判断基因型。
2. 实时荧光探针法（TaqMan）：
设计针对突变位点的特异性探针，在qPCR过程中通过荧光信号变化直接判定基因型，具有高灵敏度和自动化优势。
3. DNA测序法：
作为金标准，可准确识别所有已知及未知突变，但对设备和技术要求较高，常用于科研或疑难病例复核。

检测标准与质量控制

BLAD检测需遵循国际公认标准以确保结果可靠性：
- 国际动物卫生组织（OIE）指南：明确要求使用经过验证的分子检测方法；
- ISO 17025实验室认证：检测机构需建立严格的质量管理体系；
- 阳性/阴性对照设置：每批次检测需包含已知基因型对照样本；
- 结果判读规范：杂合子（携带者）需通过重复检测或测序确认，避免假阳性。