卫生指标（耐热大肠菌群）检测

耐热大肠菌群（Thermotolerant Coliforms），又称粪大肠菌群（Faecal Coliforms），是评价食品、饮用水、环境水体等卫生安全状况的关键微生物指标之一。该菌群主要包括埃希氏菌属（Escherichia）等能在44.5±0.2℃高温下发酵乳糖产酸产气的细菌。其存在通常指示样本近期受到人或温血动物粪便污染的可能性极高，进而提示可能存在肠道病原菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌）或病毒等致病微生物的风险，对保障公众健康、预防食源性疾病和水源性传染病具有极其重要的公共卫生学意义。因此，准确、高效地检测耐热大肠菌群是卫生监督、食品安全控制、饮用水安全保障及环境污染监测不可或缺的环节。

检测项目

本检测的核心目标是定量或定性地测定样品中耐热大肠菌群的数量或存在情况。具体项目名称通常报告为：

• 耐热大肠菌群计数 (Count of Thermotolerant Coliforms)
• 粪大肠菌群计数 (Count of Faecal Coliforms)
• 44.5°C 大肠菌群计数 (Coliform Count at 44.5°C)

结果通常以单位体积（如每100毫升水样、每克或每毫升食品样品）或单位面积（如每平方厘米食品接触面）中的菌落形成单位（CFU）或最可能数（MPN）来表示。

主要检测仪器

进行耐热大肠菌群检测通常需要以下关键仪器设备：

• 恒温培养箱：精确控温在44.5±0.2°C，用于选择性培养耐热菌群。这是区分耐热与非耐热大肠菌群的核心设备。
• 恒温水浴锅：同样精确控温在44.5±0.2°C，用于液体培养基（如EC肉汤）的耐热发酵试验。
• 微生物过滤装置：包含真空泵、过滤底座、滤杯和无菌滤膜（孔径通常为0.45μm），用于滤膜法检测（尤其适用于水质）。
• 高压蒸汽灭菌器：用于培养基、稀释液、采样器具和废弃物的灭菌。
• 生物安全柜或超净工作台：提供无菌操作环境，防止污染和保障人员安全。
• 天平：精确称量样品。
• 均质器/拍打式均质袋：用于固体或半固体样品的均匀分散。
• 移液器及无菌吸头：精确移取液体样品和稀释液。
• 试管、培养皿（平皿）、发酵管（杜氏小管）：用于盛放培养基和培养微生物。
• 菌落计数器：辅助人工或自动计数平皿上的菌落。
• pH计：确认培养基pH值符合要求。

常用检测方法

耐热大肠菌群的检测主要有以下两种标准化方法，均基于其在44.5°C下发酵乳糖产酸（和产气）的特性：

1. 多管发酵法（最可能数法，MPN法）：
   • 原理：将样品系列稀释后，接种到含有乳糖和pH指示剂（如溴甲酚紫）的液体培养基（如月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤 - LST）中进行初发酵（35/37°C）。初发酵产酸产气的管，再转接到选择性更强的培养基（如EC肉汤）中，在44.5±0.2°C水浴中进行复发酵（耐热试验）。复发酵产气者判为耐热大肠菌群阳性。根据统计学原理（如MPN表）计算样品中耐热大肠菌群的最可能数（MPN）。
   • 特点：适用于样品中菌数较低、浊度较高或含有抑制物的样品（如某些废水、污泥）。结果以MPN/100mL或MPN/g表示。
2. 滤膜法：
   • 原理：将一定体积的样品（通常是水样）通过无菌滤膜（孔径0.45μm）过滤，细菌被截留在膜表面。将滤膜贴放在选择性鉴别培养基（如M-FC培养基）上，在44.5±0.2°C下培养24±2小时。耐热大肠菌群在该培养基上会形成带有特殊颜色（如M-FC培养基上为蓝色）的菌落（有时带有金属光泽）。计数蓝色菌落即为耐热大肠菌群数。
   • 特点：操作快速，可直接计数，结果直观。尤其适用于较清洁的水体（如饮用水、地表水、游泳池水）。结果以CFU/100mL表示。
3. 酶底物法（如Colilert®）：
   • 原理：利用耐热大肠菌群特有的β-半乳糖苷酶水解ONPG（邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷）产生黄色，以及其存在的β-葡萄糖醛酸酶（主要针对大肠杆菌）水解MUG（4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷）产生荧光。将样品加入含有特定营养物和上述酶底物的试剂中，在44.5±0.2°C培养后，根据颜色变化（黄色）即可判定耐热大肠菌群存在（定性或定量）。
   • 特点：操作简便快速（24小时内），无需确认实验，可用于定量（MPN法原理）或定性检测，适用于现场和实验室。

主要检测标准

耐热大肠菌群的检测需严格遵循国家或国际认可的标准方法，以确保结果的准确性、可靠性和可比性。常用的标准包括：

• 中国国家标准 (GB)：
  • GB 4789.3-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》：包含了MPN法和平板计数法测定大肠菌群总数，可通过在44.5°C复发酵步骤（使用EC肉汤）来确认耐热大肠菌群（粪大肠菌群）。
  • GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》：明确规定了多管发酵法（使用EC肉汤）和滤膜法（使用M-FC培养基）检测耐热大肠菌群（粪大肠菌群）的具体操作。
  • GB/T 8538-2016 《饮用天然矿泉水检验方法》：包含耐热大肠菌群的检测方法（通常为滤膜法）。
• 国际标准 (ISO)：
  • ISO 9308-1:2014 《水质 大肠杆菌和大肠菌群的计数 第1部分：低细菌密度水样的滤膜法》：包含使用特定培养基在44/44.5°C培养检测耐热大肠菌群/大肠杆菌。
  • ISO 9308-2:2012 《水质 大肠杆菌和大肠菌群的计数 第2部分：最大可能数法》：包含使用液体培养基在44°C培养检测耐热大肠菌群。
• 美国标准 (FDA/USP/APHA)：
  • FDA BAM (Bacteriological Analytical Manual) Chapter 4: Enumeration of Escherichia coli and the Coliform Bacteria：详细描述了MPN法、滤膜法（mFC/MI agar）、酶底物法等用于检测粪大肠菌群（FC）和大肠杆菌（E. coli）。
  • APHA Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (如 9222 E. Fecal Coliform Procedure)：是水环境检测的权威标准，详细规定了粪大肠菌群（耐热大肠菌群）的MPN法和滤膜法。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

关于我们

部分仪器

合作客户