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真菌污染总数检测

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发布时间：2025-06-03 15:10:29 更新时间：2025-06-02 15:10:29

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

真菌污染总数检测概述

真菌污染总数检测是评估环境、食品、药品、化妆品、饲料、农产品及各类原材料、产品中活的可培养真菌（主要包括霉菌和酵母菌）总体污染程度的一项关键微生物学指标检测项目。环境中普遍存在的真菌孢子极易污染各类基质，其过度繁殖不仅会导致产品腐败变质、产生异味、改变性状（如使食品发霉结块、使织物或皮革发霉），某些产毒真菌（如黄曲霉、赭曲霉等）产生的真菌毒素（如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素等）更具有强烈的致癌性、致畸性或免疫抑制性，对食品安全和人类健康构成严重威胁。因此，准确测定样品中的真菌污染总数，对于评估产品卫生质量、控制生产过程、保障消费者安全、追溯污染源以及满足相关法规要求具有极其重要的意义。它为企业实施有效的卫生控制措施和质量管理体系提供了关键的数据支持。

检测项目

本检测的核心项目即为“真菌菌落总数” (Total Fungal Count, TFC) 或更具体地称为“霉菌和酵母菌总数” (Total Yeast and Mold Count, TYM)。该指标反映的是在特定培养条件下（通常使用适合真菌生长的培养基和温度/时间），单位质量（如克）或单位体积（如毫升、立方米空气）样品中所能生长形成的、肉眼可见的真菌菌落数量（以菌落形成单位，CFU 表示）。它代表了样品中活的、可培养的好氧或兼性厌氧真菌（主要为霉菌和酵母）的总量。

检测仪器

进行真菌污染总数检测通常需要以下核心仪器设备：

生物安全柜（或超净工作台）：提供无菌操作环境，防止样品污染和操作人员暴露。
恒温培养箱：提供恒定且适宜真菌生长的温度（通常为20-25°C或25-30°C）和湿度（如需要）。
高压蒸汽灭菌器（或干热灭菌器）：用于培养基、稀释液、玻璃器皿等的灭菌。
均质器（拍击式/旋转刀式）或旋涡混合器：用于固体或半固体样品的均匀分散，使微生物充分释放到稀释液中。
微量移液器及吸头：用于样品的精确稀释和转移。
天平：精确称量样品。
培养皿（平皿）：盛装固体培养基进行倾注培养或涂布培养。
菌落计数器（手动或自动）：用于准确计数培养后平皿上生长的菌落数。
pH计：用于调整培养基pH值。
显微镜（可选）：必要时对典型菌落形态进行初步观察。
分子生物学设备（如PCR仪、电泳系统，用于快速检测/鉴定，非总数检测必需）：在需要快速检测或鉴定特定真菌时使用。

检测方法

真菌污染总数检测的主流方法是基于培养的平板计数法，主要步骤如下：

样品制备：根据样品性状（固体、液体、半固体、表面擦拭样、空气沉降样等）进行无菌采样、称量或量取。
样品稀释：使用无菌稀释液（如含0.1%蛋白胨的生理盐水、磷酸盐缓冲液等）对样品进行十倍系列稀释，以得到适宜计数的浓度范围。
接种与培养：
- 倾注法：取一定量（通常1mL）适宜稀释度的样品液，注入无菌平皿中，立即倾注融化并冷却至约45°C的琼脂培养基（如孟加拉红培养基Rose Bengal Agar, RBA；马铃薯葡萄糖琼脂PDA；麦芽提取物琼脂MEA；或标准方法琼脂SDA等），轻轻旋转混匀，待凝固。
- 涂布法：先将琼脂培养基倒入平皿中凝固，然后将一定量（通常0.1mL）样品液滴加到平板表面，再用无菌涂布棒均匀涂布开。
培养：将接种好的平板倒置放入恒温培养箱中，在规定的温度（如20-25°C用于环境样品或某些食品标准，25-30°C更常用）下培养规定的天数（通常5-7天，某些标准要求3-5天或更长时间）。
菌落计数：培养结束后，选择菌落数在适宜范围（通常30-300 CFU）的平板进行计数。借助菌落计数器，记录所有可见的霉菌和酵母菌菌落总数。注意区分可能的细菌菌落（培养后期出现的细菌菌落通常更小、湿润、光滑）。
结果计算与报告：根据选择的稀释度、接种量和计数的菌落数，计算原始样品中的真菌菌落总数，以CFU/g, CFU/mL, CFU/cm² 或 CFU/m³ 等形式报告。

发展趋势（快速方法）：基于ATP生物发光法、阻抗法、流式细胞术、PCR/qPCR、恒温扩增技术等的快速检测方法也在发展和应用中，它们能在更短时间（数小时至1天）内提供结果，但常作为筛选或初筛手段，或需要与培养法进行相关性验证。培养法仍是确定可培养真菌总数的金标准。

检测标准

真菌污染总数检测需遵循国家、行业或国际通行的标准方法，确保结果的可比性和权威性。常用的标准包括：

中国国家标准 (GB)：
- GB 4789.15-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数》
- GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》（包含真菌检测）
- GB/T 18204.3-2013 《公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物》
- 各行业标准（如化妆品、饲料、中药材等）中关于霉菌和酵母菌总数的规定。
国际标准化组织 (ISO)：
- ISO 21527-1:2008 《食品和动物饲料的微生物学 - 酵母菌和霉菌计数的水平方法 - 第1部分：水活度大于0.95的产品菌落计数技术》
- ISO 21527-2:2008 《食品和动物饲料的微生物学 - 酵母菌和霉菌计数的水平方法 - 第2部分：水活度小于或等于0.95的产品菌落计数技术》
- ISO 16212:2017 《化妆品 - 微生物学 - 酵母菌和霉菌计数》
- ISO 14698-1:2003 《洁净室及相关受控环境 - 生物污染控制 - 第1部分：一般原理和方法》(涉及沉降菌、浮游菌检测)
美国标准 (USP/FDA/BAM)：
- USP <61> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests (包含真菌总数测试)
- FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) Chapter 18: Yeasts, Molds and Mycotoxins (虽主要针对毒素，但也包含计数方法)
药典标准： 中国药典、欧洲药典 (EP)、美国药典 (USP) 的非无菌产品微生物限度检查项下均有霉菌和酵母菌总数检查法。