猪瘟病毒核酸检测
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发布时间:2025-06-07 04:12:31 更新时间:2025-06-06 04:12:31
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性、烈性传染病,具有高发病率和高死亡率特征,对全球生猪养殖业构成严重威胁。核酸检测作为早期快速诊断的核心技术,通过直接检测病毒核酸(RNA),能在感染初期精准识别病原体,有效阻断疫情扩散。该技术不仅适用于生猪活体检测、屠宰检疫及疫苗效力评估,还在跨境贸易和无疫区建设中发挥关键作用。尤其在非洲猪瘟疫情叠加背景下,建立标准化的猪瘟病毒核酸检测体系对保障肉品安全、维护养殖经济效益及生物安全具有不可替代的战略意义。
猪瘟病毒核酸检测主要聚焦以下核心项目:一是病毒基因组特异性片段检测,如针对5'UTR、E2或NS5B基因区域的保守序列;二是病毒载量定量分析,用于评估感染程度和治疗效果;三是基因分型检测,区分野毒株与疫苗株(如C株);四是混合感染鉴别诊断,排除非洲猪瘟病毒(ASFV)等交叉感染;此外还包括环境样本(饲料、运输工具)的病毒残留筛查及种猪群的持续性监测。
现代核酸检测依赖高精度仪器平台:实时荧光定量PCR仪(如ABI 7500、Bio-Rad CFX96)可实现核酸扩增与实时定量;核酸提取仪(如MagMAX™自动提取系统)确保RNA纯化效率;数字PCR仪(如QIAGEN QIAcuity)提供绝对定量能力;此外还需配套超低温冰箱(-80℃)保存样本、生物安全柜进行无菌操作,以及凝胶成像系统验证扩增产物。便携式PCR设备(如BioFire FilmArray)正逐步应用于现场快速检测场景。
主流检测方法基于分子生物学技术:实时荧光RT-PCR为金标准,通过逆转录将病毒RNA转为cDNA,再经TaqMan探针或SYBR Green染料法进行靶标扩增与荧光信号采集,灵敏度可达10²拷贝/μL;等温扩增技术(如LAMP)无需热循环设备,适用于基层实验室;二代测序(NGS)用于全基因组溯源分析。关键步骤包括:样本采集(血清、淋巴结或脾脏组织)、RNA提取、引物探针设计(参照OIE标准序列)、扩增程序优化(通常45个循环),并通过内参基因(如β-actin)验证提取质量。
全球检测实践严格遵循国际与国家标准:世界动物卫生组织(WOAH)在《陆生动物诊断试验手册》中规定了RT-PCR引物探针序列及验证流程;中国国家标准《GB/T 22915-2008 猪瘟病毒RT-PCR检测方法》明确技术参数;欧盟参考实验室(EU-RL)发布《CSFV Real-time RT-PCR SOP》规范操作细节。关键质控要求包括:阳性对照(标准毒株RNA)、阴性对照(无核酸水)、扩增效率(90%-110%)、Ct值判定阈值(通常≤38),且实验室需通过ISO/IEC 17025认证以确保结果可靠性。
综上所述,猪瘟病毒核酸检测通过标准化、高灵敏的技术体系,为疫情预警和精准防控提供科学支撑。随着CRISPR检测等新技术的应用,未来将进一步缩短检测时间、提升现场适用性,筑牢生猪产业生物安全屏障。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
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