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弓形虫检测

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发布时间：2025-06-07 04:36:28 更新时间：2025-06-06 04:36:28

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

弓形虫检测概述

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种广泛分布的细胞内寄生原虫，可感染包括人类在内的多种温血动物。人类感染多因摄入被卵囊污染的食物或水、食用未煮熟的含包囊的肉类，或母婴垂直传播。虽然多数健康成人感染后无症状或症状轻微（类似流感），但弓形虫对免疫功能低下者（如艾滋病患者、器官移植受者）和孕妇构成严重威胁，可导致脑炎、脉络膜视网膜炎，甚至引发胎儿先天性感染，造成流产、死胎或新生儿严重缺陷（如脑积水、智力障碍、视力损害）。因此，及时、准确的弓形虫检测对于高危人群的筛查、感染诊断、治疗监测以及孕前/孕期保健至关重要。

弓形虫检测项目

弓形虫感染的实验室检测主要集中在以下几个方面：

血清学抗体检测 (Serological Antibody Testing)： 这是最常用、最成熟的方法，通过检测人体血液中针对弓形虫的特异性抗体来判断感染状态。
- 弓形虫特异性IgG抗体 (Toxoplasma-specific IgG)： 通常在感染后1-2周出现，6-8周达到峰值，之后缓慢下降但可终生维持在低水平，提示既往感染或慢性感染。定量检测可用于观察抗体水平变化趋势。
- 弓形虫特异性IgM抗体 (Toxoplasma-specific IgM)： 感染后约1周出现，通常3-6个月内降至低水平或消失，提示近期或活动性感染。但需注意IgM有时可持续存在数月甚至数年，也可能出现假阳性（如类风湿因子干扰）。
- 弓形虫特异性IgA抗体 (Toxoplasma-specific IgA)： 有时作为IgM的补充，尤其在先天性感染或免疫抑制患者的诊断中。
- 弓形虫特异性IgE抗体 (Toxoplasma-specific IgE)： 较少常规检测，可能与急性感染相关。
- 亲和力试验 (Avidity Test)： 检测IgG抗体与抗原结合的牢固程度（亲和力）。高亲和力提示感染发生在3-5个月之前，有助于区分近期感染和远期感染，对孕期感染的诊断尤其重要。
分子生物学检测 (Molecular Detection)：
- 核酸扩增检测 (Nucleic Acid Amplification Tests, NAATs)： 主要是聚合酶链式反应（PCR）技术，直接检测弓形虫的DNA（在B1基因、REP-529基因、ITS-1基因等保守区域设计引物）。主要用于检测羊水（诊断胎儿先天性感染）、脑脊液（诊断弓形虫脑炎）、玻璃体液（诊断眼弓形虫病）、血液（尤其在免疫抑制患者的活动性感染中）和活检组织样本中的病原体核酸，具有高特异性和敏感性。
病原体分离与鉴定 (Parasite Isolation and Identification)：
- 细胞培养/动物接种： 将样本（如血液、体液、组织）接种到敏感细胞系（如人成纤维细胞）或小鼠体内，观察弓形虫增殖情况。此法特异性高，是诊断的“金标准”之一，但耗时长（需数周）、技术要求高、敏感性有限，已较少用于常规诊断。
- 直接镜检/组织病理学： 在组织切片（如淋巴结、胎盘、脑组织）或体液中寻找弓形虫速殖子（tachyzoites）或包囊（cysts）。敏感性低，依赖操作者经验。
抗原检测 (Antigen Detection)： 直接检测样本中的弓形虫抗原。方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳胶凝集试验等，但敏感性通常不如抗体检测或PCR，应用较少。

弓形虫检测仪器

根据检测方法不同，主要使用以下仪器设备：

酶标仪 (Microplate Reader)： 用于读取酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光免疫分析（CLIA）等基于微孔板的实验光密度(OD)值或发光值(RLU)，是血清学抗体检测（IgG, IgM, IgA等）的核心设备。
全自动免疫分析仪 (Automated Immunoassay Analyzers)： 集成样本处理、试剂添加、孵育、清洗、信号读取和结果判定的自动化平台，可高效进行各种免疫学检测（包括化学发光法、电化学发光法、荧光免疫法等），广泛应用于弓形虫抗体筛查和定量检测。
荧光显微镜 (Fluorescence Microscope)： 用于观察免疫荧光法（IFA）检测抗体时产生的特异性荧光信号（如抗弓形虫IgG/IgM抗体IFA检测），或观察组织样本中经荧光标记的弓形虫。
聚合酶链式反应仪 (Thermal Cycler/PCR仪)： 用于进行核酸（DNA）的体外扩增，是分子生物学检测（PCR）的基础设备。包括常规PCR仪和实时荧光定量PCR（qPCR）仪。
实时荧光定量PCR仪 (Real-time PCR Instrument / qPCR仪)： 在扩增过程中实时监测荧光信号，具有高灵敏度、高特异性、可定量、闭管操作减少污染风险等优点，是当前弓形虫核酸分子诊断的主流设备。
电泳仪系统 (Electrophoresis System)： 用于传统PCR扩增产物（如琼脂糖凝胶电泳）或某些分子检测产物的分离和可视化（较少用于弓形虫常规临床PCR）。
生物安全柜 (Biosafety Cabinet, BSC)： 在处理样本（尤其是可能含活病原体的组织、体液）和进行核酸提取等操作时提供生物安全防护。
核酸提取仪 (Nucleic Acid Extraction System)： 自动化从样本（血液、羊水、脑脊液、组织等）中纯化弓形虫DNA或总核酸，提高效率和标准化程度。
细胞培养设备： 包括CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台等，用于病原体分离培养。

弓形虫检测方法

主要检测方法的流程与技术特点：

血清学抗体检测 (ELISA/CIA/CLIA/ECLIA/IFA)：
- 原理： 基于抗原-抗体特异性结合反应。
- 常见方法：
  - 酶联免疫吸附试验 (ELISA)： 将弓形虫抗原包被在微孔板上，加入待测血清。若存在特异性抗体，则形成抗原-抗体复合物。加入酶标记的二抗（抗人IgG/IgM/IgA）并显色，通过酶标仪测定吸光度(OD)，判断抗体有无及相对水平。有间接法、捕获法（尤其适合IgM）、双抗原夹心法（适合所有抗体类型）等。
  - 化学发光免疫分析 (CLIA)/电化学发光免疫分析(ECLIA)： 基本原理与ELISA类似，但用化学发光或电化学发光物质标记二抗或抗原。反应后加入发光底物或施加电压产生发光信号，由仪器读取发光值(RLU)。具有自动化程度高、检测范围宽、灵敏度高等优点。
  - 免疫荧光法 (IFA)： 将弓形虫速殖子抗原固定在玻片上，加入待测血清反应。洗去未结合抗体后，加入荧光素标记的抗人IgG/IgM二抗。在荧光显微镜下观察特异性荧光模式。是传统的“金标准”方法之一，但主观性强，操作繁琐。
- 结果判读： 通常有定性（阳性/阴性/可疑）和定量（报告具体数值或国际单位IU/mL）。需结合IgG、IgM结果及亲和力试验进行综合解释。
核酸扩增检测 (PCR/qPCR)：
- 原理： 利用特异性引物和DNA聚合酶，在体外对弓形虫DNA的特异性靶序列（如B1基因、REP-529基因）进行指数级扩增。