病毒性脑病和视网膜病(病毒性神经坏死病)检测
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发布时间:2025-06-07 05:07:23 更新时间:2025-06-06 05:07:23
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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病毒性脑病和视网膜病(Viral Encephalopathy and Retinopathy, VER),又称病毒性神经坏死病(Viral Nervous Necrosis, VNN),是一种严重危害海水和淡水鱼类的病毒性传染病,尤其对石斑鱼、鲈鱼、鲷科鱼类、比目鱼等经济鱼种的幼鱼和鱼苗造成毁灭性损失。该病由神经坏死病毒(Nervous Necrosis Virus, NNV)引起,主要侵袭鱼的中枢神经系统(脑和脊髓)以及视网膜组织,导致病鱼出现螺旋状游泳、体色变黑、厌食、眼球浑浊甚至脱落等典型神经症状,死亡率极高。及时、准确地进行实验室检测是防控该病的关键环节。
该病的病原体——神经坏死病毒(NNV),属于诺达病毒科(Nodaviridae)的乙型野田村病毒属(Betanodavirus)。NNV具有高度的传染性和致病性,可通过垂直传播(亲鱼到鱼卵/鱼苗)和水平传播(水体、接触、饵料等)途径扩散。因此,对亲鱼、鱼卵、鱼苗以及养殖环境进行定期的NNV检测筛查,是建立健康种群、实施有效生物安全和制定合理防控策略的基础。
鉴于病毒性神经坏死病对水产养殖业的巨大威胁,建立标准化、高灵敏度和特异性的检测方法体系至关重要。有效的检测不仅能用于临床病例的确诊,更能服务于无规定疫病苗种场建设、流行病学调查、引种检疫、疫病监测净化等重大需求。
病毒性神经坏死病的主要检测项目聚焦于以下几个方面:
1. NNV病原检测: 这是最核心的项目,旨在直接确定样本中是否存在NNV或其核酸/抗原。样本类型多样,包括:
2. 血清学检测: 主要用于检测鱼体内针对NNV的特异性抗体,可反映鱼群既往感染史或免疫状态。这对于评估群体免疫水平、追溯感染源或在缺乏典型症状时进行流行病学调查具有价值。常用方法为酶联免疫吸附试验(ELISA)。
3. 组织病理学检查: 通过对脑、视网膜和脊髓等靶器官的组织切片进行苏木精-伊红(H&E)染色,观察特征性的病变(如神经组织空泡化坏死、神经元固缩、细胞核内包涵体等),可为诊断提供重要形态学依据。
NNV检测涉及多种精密仪器,常见的包括:
1. 分子生物学仪器:
2. 细胞培养设备:
3. 血清学检测仪器:
4. 组织病理学仪器:
5. 电镜设备:
6. 样本处理与保存设备:
针对NNV的检测,主要采用以下几种方法,各有其优缺点和适用范围:
1. 病毒分离培养 (Virus Isolation, VI):
2. 聚合酶链式反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR): 是目前最常用、最灵敏、最特异的NNV核酸检测方法。
3. 逆转录环介导等温扩增 (Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification, RT-LAMP):
4. 酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA):
5. 组织病理学检查 (Histopathology):
6. 免疫组织化学 (Immunohistochemistry, IHC):
7. 电子显微镜观察 (Electron Microscopy, EM):
为确保NNV检测结果的准确性、可比性和可靠性,检测活动必须遵循相关的国际、国家或行业标准。主要的标准包括:
1. 世界动物卫生组织 (WOAH, 原OIE) 标准: 《水生动物疾病诊断手册》中详细规定了病毒性神经坏死病的诊断方法和标准,是国际认可的金标准。要求确诊需要结合临床症状、组织病理学变化以及病毒分离鉴定或RT-PCR检测结果。
2. 国家标准:
3. 行业标准/地方标准: 各地区或行业协会也可能根据本地养殖特点和防控需求,制定更具体的操作规范或检测标准。
检测要点: 无论采用哪种方法,严格的实验设计、规范的操作流程、有效的阴阳性对照设置、防止交叉污染以及结果判读的标准化都是获得可靠检测结果的关键。样本的采集、保存和运输也必须符合标准要求。
综上所述,病毒性脑病和视网膜病(病毒性神经坏死病)的检测是一个涉及多项目、多技术、多标准的综合体系。根据检测目的(如临床诊断、疫情监测、引种检疫、净化评估等)、样本类型、实验室条件以及时效性要求,合理选择检测项目和方法,并严格遵循相关标准进行操作,是有效防控该病、保障水产养殖业健康发展的重要科学手段。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
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