大肠菌落检测：保障食品安全与环境卫生的关键环节
大肠菌落（Coliforms），特别是其中的耐热大肠菌群（又称粪大肠菌群，如大肠埃希氏菌E. coli）是国际上普遍采用的评价食品、饮用水及环境水体（如地表水、游泳池水）等卫生安全状况的重要指示性微生物指标。它们的检测意义在于：大肠菌群主要来源于人和温血动物的肠道，其数量的多少可以间接反映样本被粪便污染的程度，进而提示存在肠道致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、病毒等）污染的可能性。因此，大肠菌落检测是评价食品加工卫生、饮用水安全、环境水质以及消毒效果是否达标的核心项目，对于预防食源性疾病、水源性疾病及保障公共卫生安全具有至关重要的作用。
核心检测项目
在大肠菌落检测范畴内，通常关注以下关键项目：
1. 总大肠菌群 (Total Coliforms)： 包括能在37°C培养24-48小时内发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧、革兰氏阴性的无芽孢杆菌。虽然来源广泛（包括土壤、植物等环境），但高水平存在通常指示卫生状况不佳或污染。
2. 耐热大肠菌群 (Thermotolerant Coliforms / Faecal Coliforms)： 指在44.5°C ± 0.2°C条件下仍能发酵乳糖产酸产气的总大肠菌群。它们主要来源于温血动物的粪便，其检出更能直接指示粪便污染的存在。
3. 大肠埃希氏菌 (Escherichia coli)： 是耐热大肠菌群中最具粪便指示特异性的菌种。其检测是判断是否存在近期粪便污染以及潜在肠道病原体风险的“金标准”之一。
常用检测仪器与设备
大肠菌落的检测依赖于实验室一系列标准化的仪器设备：
1. 无菌操作设备： 生物安全柜或超净工作台（用于样本前处理、稀释、接种的无菌环境），高压蒸汽灭菌锅（培养基、器械、废弃物灭菌）。
2. 培养设备： 恒温培养箱（精确控温于35°C ± 0.5°C用于总大肠菌群，44.5°C ± 0.2°C用于耐热大肠菌群/E. coli），恒温水浴锅（用于特定步骤如EC肉汤的培养）。
3. 样品处理与接种设备： 天平（称量样本）、均质器/拍打式均质袋（固体样品均质）、移液器/吸管（液体转移、稀释）、试管、培养皿（固体培养基接种）、发酵管（多管发酵法）。
4. 膜过滤装置 (Membrane Filtration)： 包括过滤瓶、真空泵、无菌滤膜（孔径通常为0.45μm）、镊子等，用于水质等液态样本的过滤富集。
5. 试剂与培养基： 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（Lauryl Sulfate Tryptose Broth, LST）、煌绿乳糖胆盐肉汤（Brilliant Green Lactose Bile Broth, BGLB）、EC肉汤（E. coli Broth）、伊红美蓝琼脂（Eosin Methylene Blue Agar, EMB）、麦康凯琼脂（MacConkey Agar）、MUG培养基（用于E. coli 荧光检测）、科玛嘉大肠菌群显色培养基等。
6. 鉴定与计数设备： 菌落计数器（人工计数）、显微镜、革兰氏染色试剂盒、生化鉴定管/系统（如API 20E）、荧光检测灯（用于检测E. coli的MUG水解产物荧光），以及自动化设备（如酶底物法检测仪、PCR仪/荧光定量PCR仪用于分子生物学快速检测）。
主要检测方法
根据样本类型、检测精度要求、时效性和实验室条件，常用以下方法：
1. 多管发酵法 (Multiple-Tube Fermentation Technique / Most Probable Number, MPN)：
* 原理： 基于统计学概率，通过系列稀释样本接种于含乳糖的选择性液体培养基中，根据产酸产气的阳性管数查MPN表，估算样品中大肠菌群的最可能数。
* 步骤：
* 初发酵试验： 样本稀释后接种于LST肉汤管中，35°C培养24-48小时，观察产气（倒置小导管内有气泡）为阳性。
* 复发酵试验（确证试验）： 将初发酵阳性管转种至BGLB肉汤管中（总大肠菌群确证）或EC肉汤管中（耐热大肠菌群确证，44.5°C培养24小时），再次观察产气。BGLB或EC产气为阳性。
* E. coli 确证： 将EC阳性管转种至EMB或麦康凯琼脂平板分离，挑取典型菌落（如EMB上的金属光泽菌落）进行革兰氏染色（应为G-杆菌）、IMViC试验（典型E. coli 为 ++--）或其他生化鉴定。MUG-EC肉汤结合荧光检测也是常用确证E. coli的方法。
* 优点： 适用于各种类型样品（水、食品、环境拭子等），尤其适用于混浊或有抑菌物质的样本。
* 缺点： 耗时较长（通常2-4天），操作步骤多，结果需查表估算。
2. 滤膜法 (Membrane Filtration)：
* 原理： 将一定体积（通常100ml）的水样通过无菌滤膜（孔径0.45μm）过滤，将细菌截留在膜上。将膜贴于选择性培养基（如M-Endo LES琼脂用于总大肠菌群）上培养，计数特征性菌落。
* 步骤： 过滤水样->转移滤膜至培养基->培养（35°C, 24小时）->计数（总大肠菌群在M-Endo上通常为金属光泽粉红色菌落）。如需检测耐热大肠菌群或E. coli，则需将滤膜转移至M-FC培养基（44.5°C培养）或含MUG培养基，观察蓝色菌落或荧光。
* 优点： 快速（24-48小时），可直接计数，适用于清澈、低浊度、低杂菌的水样。
* 缺点： 对混浊水样、含大量悬浮物或抑制物样本不适用。
3. 平板计数法 (Plate Count)：
* 原理： 适用于食品、乳制品等固体或半固体样品。将样本稀释液倾注或涂布于选择性固体培养基（如结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA用于总大肠菌群）上，培养后计数典型菌落（VRBA上为紫红色带胆盐沉淀圈的菌落）。
* 步骤： 样品均质稀释->倾注或涂布VRBA->覆盖一层VRBA（防止蔓延）->培养（35°C, 18-24小时）->计数典型菌落->必要时确证（挑典型菌落接种BGLB观察产气）。
* 优点： 可直接计数，结果相对直观。
* 缺点： 易受杂菌干扰，有时需确证试验，不适合含杂菌多的样品。
4. 酶底物法 (Defined Substrate Technology, DST)：
* 原理： 利用大肠菌群（或E. coli）特异性酶（如β-半乳糖苷酶）水解无色底物（如ONPG）产生颜色变化，以及E. coli特有的β-葡萄糖醛酸酶水解底物（如MUG）产生荧光来进行快速检测与定量（MPN值）。
* 步骤： 将样本加入含有特定营养物和酶底物的试剂中（如Colilert, Colisure试剂），混匀->封入定量盘（Quanti-Tray）或分装试管->恒温培养（35°C, 总大肠菌群；44.5°C，E. coli）->读取颜色变化（黄色表示总大肠菌群阳性）和/或荧光（在366nm紫外灯下，蓝色荧光表示E. coli阳性）->根据阳性孔位数查MPN表。
*
CMA认证
检验检测机构资质认定证书
证书编号：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS认可
实验室认可证书
证书编号：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO认证
质量管理体系认证证书
证书编号：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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