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耐胆盐革兰氏阴性菌检测

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发布时间：2025-08-01 19:42:38 更新时间：2025-07-31 19:42:38

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

耐胆盐革兰氏阴性菌检测概述

耐胆盐革兰氏阴性菌是指能够在含有胆盐的培养基中生长繁殖的一类革兰氏阴性细菌，常见于环境、食品及药品中。这类细菌通常具有较强的环境适应性和潜在致病性，其检测在食品安全、药品质量控制、临床诊断和环境监测等领域具有重要意义。通过检测样品中耐胆盐革兰氏阴性菌的存在及数量，可评估产品或环境的卫生状况、潜在的微生物污染风险，为采取有效的控制措施提供科学依据。常见的目标菌包括大肠埃希氏菌、沙门氏菌、志贺氏菌等肠道病原菌或指示菌。

检测项目

耐胆盐革兰氏阴性菌检测的核心项目主要包括：
- 胆盐耐受能力确认：在含特定浓度胆盐的培养基中的生长情况。
- 革兰氏染色反应：确认为革兰氏阴性形态（红色杆菌）。
- 氧化酶试验：区分肠杆菌科（氧化酶阴性）与非发酵菌等。
- 选择性分离与计数：在专用平板上分离目标菌并计算菌落形成单位数（CFU/g 或 CFU/mL）。
根据具体应用场景，还可进一步进行生化鉴定（如API 20E系统）、血清学分型或分子生物学鉴定（如特定毒力基因检测）。

检测仪器

检测过程中需使用多种精密仪器以确保结果的准确性和重现性，主要包括：
- 微生物培养箱：提供恒温环境（通常35-37°C）用于样品培养。
- 生物安全柜：提供无菌操作环境，保护操作者和样品。
- 高压蒸汽灭菌器：对培养基、器械及废弃物进行灭菌处理。
- 显微镜：用于革兰氏染色结果的观察。
- 菌落计数器/自动菌落分析仪：用于菌落计数。
- PCR仪及电泳设备：用于分子生物学鉴定（如需要）。
- 酶标仪/生化鉴定系统：用于自动化生化反应测试。

检测方法

检测通常遵循标准化流程，主要步骤包括：
1. 样品前处理：根据样品类型（固体、液体）进行均质、稀释等。
2. 增菌培养：将样品接种到含胆盐的液体增菌培养基（如肠道菌增菌肉汤EE Broth）中，在适宜温度下培养18-24小时。
3. 分离培养：将增菌液或稀释液划线接种到含胆盐的选择性/指示性琼脂平板（如麦康凯琼脂MacConkey Agar, EMB琼脂）上，培养24-48小时。
4. 菌落观察与挑选：观察平板上是否生长出符合目标菌特征的菌落（如在麦康凯琼脂上呈粉红色菌落为乳糖发酵菌）。
5. 纯化与鉴定：挑取可疑菌落进行纯培养，随后进行革兰氏染色、氧化酶试验、关键生化试验（如IMViC试验）等。
6. 确认与计数：对符合耐胆盐革兰氏阴性菌特性的分离株进行确认，并根据平板菌落数计算原始样品中的菌量。

关键的“耐胆盐”特性通常通过其在含胆盐的选择性培养基上的生长能力来判定。特定情况下，可进行胆盐浓度梯度实验，观察细菌在不同浓度胆盐下的生长抑制情况。

检测标准

耐胆盐革兰氏阴性菌检测需严格遵循国家或国际公认的标准方法，以确保结果的可比性和权威性。主要参考标准包括：
- 中国国家标准 (GB)：
  • GB 4789.3-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》 - 涉及胆盐乳糖发酵管的应用。
  • GB 4789.4-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》 - 使用含胆盐的选择性增菌和分离步骤。
  • 《中华人民共和国药典》（现行版）通则<1105>、<1106>等非无菌产品微生物限度检查中关于耐胆盐革兰阴性菌的控制菌检查法。
- 国际标准 (ISO)：
  • ISO 21528-1:2017 & 21528-2:2017 《Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae》 - 详细规定了肠杆菌科（多为耐胆盐革兰阴性菌）的检测计数方法。
  • ISO 6579-1:2017 《Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping of Salmonella》 - 沙门氏菌检测金标准，包含胆盐应用。
- 美国标准 (USP/FDA BAM)：
  • 《USP》 <62> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms - 明确对大肠埃希氏菌、沙门氏菌等耐胆盐菌的检测要求。
  • FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) - 提供详细的食品病原菌检测方法。

这些标准详细规定了培养基成分（包括胆盐种类与浓度，如牛胆盐或去氧胆酸钠）、培养条件、操作步骤、结果判读和报告要求。实验室需定期进行方法验证和质控（如使用标准菌株）以确保符合标准要求。