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紫外吸收检测

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发布时间：2025-04-22 21:30:22 更新时间：2025-05-27 20:17:50

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

紫外吸收检测概述

紫外吸收检测是一种基于物质对紫外光（通常波长范围为190-400 nm）选择性吸收的分析技术，广泛应用于化学、生物医药、环境监测及食品工业等领域。其核心原理是分子中的共轭结构或特定官能团在紫外光照射下发生电子跃迁，导致特定波长光的吸收，通过测量吸光度值可定量分析目标物质浓度。该方法具有灵敏度高、操作简便、成本较低等优势，尤其适用于有机化合物、核酸、蛋白质等物质的定性与定量分析。

检测项目

紫外吸收检测的主要应用包括：
1. 有机物定量分析（如苯环类化合物、维生素、药物活性成分）
2. 核酸浓度测定（DNA/RNA的A260值检测）
3. 蛋白质含量测定（基于A280吸光度）
4. 溶液纯度评估（通过吸收光谱特征峰分析）
5. 环境污染物检测（如多环芳烃、酚类化合物）

检测仪器

关键设备包括：
1. 紫外-可见分光光度计：核心部件为氘灯/钨灯光源、单色器、样品池和光电检测器
2. 高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）：用于复杂样品分离与在线检测
3. 微孔板读数仪：适配96/384孔板的高通量检测
4. 纳米颗粒分析仪：结合动态光散射与紫外吸收特性分析

检测方法

常规操作流程包括：
1. 直接测定法：在最大吸收波长（λ_max）下测量样品吸光度，通过标准曲线定量
2. 差示光谱法：消除背景干扰，适用于低浓度或复杂基质样品
3. 导数光谱法：通过微分处理提高重叠峰的分辨率
4. 多波长联用法：结合多个特征波长数据提高分析准确性

检测标准

主要遵循以下规范：
1. 国际标准：ISO 11348（水质检测）、USP<857>（药典紫外分光法）
2. 国家标准：GB/T 9721（化学试剂紫外吸收测定通则）
3. 行业标准：YY/T 1295（医疗器械紫外灭菌验证）
4. 方法验证要求：需验证线性范围（R²≥0.998）、检测限（LOD）、定量限（LOQ）及精密度（RSD＜2%）

实验时需注意：严格控制溶剂纯度（如HPLC级试剂）、比色皿光程校准、定期进行基线校正，并依据样品特性选择合适波长（如蛋白质检测需避开Tris缓冲液的270 nm干扰峰）。