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核酸扩增反向点杂交试剂（盒）检测

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发布时间：2025-04-23 15:26:44 更新时间：2025-05-27 20:42:11

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

核酸扩增反向点杂交试剂（盒）检测概述

核酸扩增反向点杂交试剂（盒）是一种基于分子生物学技术的高灵敏度检测工具，广泛应用于病原微生物检测、基因分型、遗传病筛查及个体化医疗等领域。其核心原理是通过核酸扩增技术（如PCR）对目标DNA/RNA进行特异性扩增，随后利用反向点杂交技术将扩增产物与固定于膜片或芯片上的探针结合，通过显色或荧光信号判读结果。该方法兼具高特异性与高通量优势，尤其适用于多重病原体或基因多态性的同步检测。

检测项目

核酸扩增反向点杂交试剂（盒）主要用于以下检测场景： 1. 病原微生物检测：如HPV分型、结核分枝杆菌耐药基因、呼吸道病毒（流感、腺病毒等）鉴定； 2. 遗传性疾病筛查：如地中海贫血、耳聋基因突变位点检测； 3. 肿瘤相关标志物分析：如EGFR、KRAS等基因突变检测； 4. 个体化用药指导：如CYP2C19、ALDH2等药物代谢相关基因分型。

检测仪器

完成检测需依赖以下关键设备： 1. 核酸扩增仪：用于PCR扩增，需具备温控精度高、模块均一性好的特性； 2. 杂交仪：提供恒温震荡环境，确保探针与靶序列高效结合； 3. 洗膜设备：用于去除未结合的核酸片段，降低背景干扰； 4. 成像分析系统：通过扫描仪或化学发光仪捕获信号，配合专用软件进行结果判读。

检测方法

标准操作流程分为四个阶段： 1. 核酸提取：从样本（血液、组织、分泌物等）中纯化目标核酸； 2. 扩增反应：使用特异性引物进行PCR扩增，引入标记物（如生物素）； 3. 杂交与显色：将扩增产物与固定化探针杂交，通过酶联反应显色； 4. 结果判读：根据显色斑点位置和强度，对照标准图谱确定靶标存在与否。

检测标准

该技术需严格遵循以下标准规范： 1. 国内标准： - YY/T 1183-2010《核酸扩增反向点杂交试剂（盒）》 - CNAS-CL02-A009《分子诊断领域认可准则》 2. 国际标准： - ISO 15189《医学实验室质量和能力要求》 - CLSI MM系列文件（如MM06-A） 3. 质控要求：每批次需包含阴/阳性对照、内参基因，并定期进行精密度、灵敏度验证。