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改良罗氏基础培养基检测

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发布时间：2025-04-29 14:25:59 更新时间：2025-05-27 22:21:20

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

改良罗氏基础培养基检测的意义与背景

改良罗氏基础培养基（Modified Löwenstein-Jensen Medium）是临床微生物学中用于结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）分离培养的核心培养基之一。相较于传统罗氏培养基，其通过优化营养成分（如甘油、孔雀绿浓度）和选择性抑制剂的配比，显著提高了分枝杆菌的检出率与纯度，同时减少杂菌干扰。该培养基广泛应用于结核病的病原学诊断、药物敏感性试验及流行病学研究。为确保检测结果的可靠性与标准化，需对其性能进行系统性质量控制，涉及检测项目、仪器、方法及标准的严格规范。

检测项目

改良罗氏基础培养基的检测主要包括以下关键项目：
1. 生长支持能力测试：验证培养基对标准菌株（如结核分枝杆菌H37Rv）的促生长效果，评估菌落形成时间、密度及形态特征。
2. 选择性抑制性能：测试培养基对非分枝杆菌（如金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌）的抑制效果，确保杂菌污染率≤5%。
3. pH稳定性：检测培养基灭菌前后的pH值变化范围（通常要求6.8-7.2），避免酸碱度异常影响分枝杆菌生长。
4. 营养成分均一性：通过分层采样分析培养基各区域的成分分布一致性。
5. 药物敏感性测试适用性：验证培养基与抗结核药物（如异烟肼、利福平）的兼容性及抑菌圈判读准确性。

检测仪器

检测过程中需使用以下核心仪器设备：
- 微生物培养箱：提供恒温（35-37℃）、高湿度（≥70%）及CO₂浓度（5-10%）的标准化培养环境。
- pH计：精确测定培养基pH值，精度需达±0.01。
- 分光光度计：用于菌悬液浓度标定（如麦氏比浊法）。
- 生物安全柜：确保操作过程符合BSL-3级防护要求。
- 离心机：用于临床样本前处理的菌体浓缩。

检测方法

检测流程遵循以下标准化方法：
1. 样本接种与培养：将标准菌株或临床样本悬液均匀涂布于培养基斜面，倾斜放置避免冷凝水聚集，培养4-8周并定期观察菌落生长情况。
2. 选择性试验：在培养基中平行接种目标菌与干扰菌，记录杂菌抑制率及目标菌生长曲线。
3. 质量控制对比：与商业质控培养基同步测试，通过菌落计数（CFU/mL）评估性能差异。
4. 药物敏感性试验：采用比例法或绝对浓度法，加入梯度浓度抗结核药物，观察抑菌效果并计算临界浓度值。

检测标准

改良罗氏基础培养基的检测需符合以下国内外标准：
- 国际标准：WHO《结核病实验室手册》、CLSI M24-A3指南对分枝杆菌培养的性能要求。
- 国家标准：GB 4789.28-2013《培养基和试剂的质量要求》、WS 288-2017《肺结核诊断》。
- 行业规范：要求培养基灭菌后无菌率≥99%，结核分枝杆菌检出周期≤28天，质控菌株回收率≥70%。检测结果需通过重复性试验（RSD≤15%）和实验室间比对验证。

通过上述系统化的检测流程，可确保改良罗氏基础培养基在结核病诊断中的灵敏度、特异性及可重复性，为临床提供可靠的病原学依据。