核酸清除试验

试验背景

　　核酸检测技术已成为血液筛查实验室的重要实验手段，但因其灵敏度高的特点，同时实验室也容易受到污染，特别是核酸的气溶胶污染比较严重。

　　在新冠病毒核酸检测过程中，常见以下几种污染类型：扩增片段的污染(产物污染);天然基因组 DNA的污染、试剂污染(贮存液或工作液)以及样本间交叉污染。

　　核酸检测实验室污染的主要来源是扩增产物的污染。 目前国内所有二级以上综合医院都具备了核酸检测能力，大部分医院也设立了PCR 实验室，高强度的核酸检测任务已成为了检验员的工作常态，如果一旦出现实验室核酸污染，可能会造成假阳性的结果，导致结果不可信，甚至可能会危及实验室工作人员安全。 核酸实验室污染后难以清除，有可能造成实验室不能使用的风险。

　　如果一旦出现核酸实验室污染，除了常规的清洁消毒方法之外，还可以进行通过空间灭菌方法进行核酸清除试验。

试验对象

　　可以针对核酸去除剂、核酸清除剂、核酸降解剂、核酸降解仪等核酸清除产品检测，开展核酸气溶胶污染的空气清除试验检测。

试验方法

　　1.核酸清除试验检测设备

　　3m3试验舱、二级生物安全柜、荧光定量PCR仪、涡旋混匀器、低温冰箱、低温高速离心机、PCR专用微量移液器、水浴锅。

　　2. 核酸清除试验试剂耗材

　　病毒DNA/RNA提取试剂盒、ASFV基因质粒荧光定量qPCR试剂盒、TE缓冲液、96~100%乙醇、超纯水、去RNA酶水、PBS溶液等。

　　3. 核酸清除试验步骤

　　1)样品配制：根据客户要求倍比稀释，待用;

　　2)将稀释好的核酸降解剂加入到消毒喷雾设备中，将设备放入3m3试验舱中，连接电源并设置好喷雾程序，待用;

　　3)试验样品的制备：在对照组和样品组植绒棉签上各加50μL阳性对照，固定在EP管架上待其自然风干;

　　4)将其中对照组植绒棉签放置在室温下(不熏蒸)，样品组植绒棉签固定在EP管架上放入试验舱中，关紧舱门;

　　5)通过橡胶手套按下消毒喷雾设备的启动键，喷雾10min，待喷雾结束后开始计时;

　　6)静置密闭2h后，通过传递舱将试验组的植绒棉签取出，开启净化30 min;

　　7)将每支植绒棉签在1mL离心管中各自用1mLTE缓冲液进行洗脱，取200μuL进行核酸提取;

　　8)配制标准曲线，然后进行qPCR试验。

　　4. 结果计算

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