改良吉姆萨染色

实验流程：

　　涂片/组织切片-改良吉姆萨染色-脱水封片-显微镜镜检

结果判读：

样本准备方法及送样运输要求（为保证染色成功率，血液、肺泡灌洗液、骨髓样本建议客户按以下方法自行涂片固定后送样）：

1.涂片的制作方法：

1.1 血涂片制备：

（1）取新鲜血液（若用抗凝管收集的血液，放置最好不要超过24h，否则血液中白细胞的数量以及种类会明显减少),选用干净的粘附玻片，用移液枪吸取10ul的血液，滴加在玻片的一侧(一般都是磨砂对侧)。

（2）再取一片辅助玻片（也可选用盖玻片，依据个人手的力道习惯选择），以45°角将其宽边靠近血液，血液沿着接触边缘向两边晕开，当两边都到达边缘时，轻轻地稳健且匀速地推向磨砂面一侧，进行涂片，然后快速果断地拿走载玻片。可见涂片首尾分明，厚薄均匀。（一般情况下，涂抹速度力道适中的话，取走玻片时载玻片上的血几乎无残留，且涂抹出的血涂片无明显细胞破碎，变形。在显微镜下可观察到细胞呈单个紧密排列，整体比较均匀。）

（3）自然晾干后，用甲醇浸泡固定15min，自然晾干后4℃保存运输。

1.2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制备：

（1）取细胞悬液，2800r 4℃离心5min去上清。若沉淀红色较多，则需要用红细胞裂解液（G2015）裂解红细胞。细胞沉淀加入红细胞裂解液200ul，涡旋混匀，放在冰上裂解2min后加入1ml PBS终止裂解。2800r 4℃离心5min去上清后加PBS重悬。若沉淀红色不多，则不需要裂解红细胞，直接弃上清液，加PBS重悬。根据细胞沉淀量对应加入PBS：

①若肉眼观察无明显细胞沉淀，直接加入50ul PBS，用移液枪吹打混匀后，涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的小圆圈中（3cm×2cm的椭圆)；

②若细胞沉淀量为绿豆大小，加入200ul PBS，用移液枪吹打混匀后，吸取50ul，涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的小圆圈中（3cm×2cm的椭圆)；

③若细胞沉淀量很多，黄豆大小或更大，加入1ml PBS,用移液枪吹打混匀后，吸取150ul，涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的大圆圈中（最大长边约5cm，最大短边约2cm的椭圆）。在显微镜下观察细胞量的多少，若还是过厚，再用PBS对倍稀释该细胞悬液，直至在显微镜下观察到细胞量涂布均匀。

（2）用移液枪将细胞悬液铺满整个圆圈，涂片放置自然晾干（因细胞未经固定，不可通过烘箱加快晾干）。

（3）将晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min，自然风干，4℃保存运输。

2. 石蜡切片常温运输，冰冻切片-20℃运输。

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