改良吉姆萨染色
1对1客服专属服务,免费制定检测方案,15分钟极速响应
发布时间:2024-05-21 08:15:32 更新时间:2024-10-29 18:09:23
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实验流程:
涂片/组织切片-改良吉姆萨染色-脱水封片-显微镜镜检
结果判读:
细胞类型 |
细胞特征及染色结果 |
成熟红细胞 |
圆饼状,粉红色,无核 |
中性粒细胞 |
细胞核蓝色,呈马蹄形,杆状或分叶形;胞质淡紫红色 |
嗜酸性颗粒 |
细胞核蓝色,呈马蹄形,杆状或分叶形;胞质内深红色颗粒 |
嗜碱性粒细胞 |
细胞核蓝色,呈马蹄形,杆状或分叶形;胞质内蓝紫色颗粒 |
淋巴细胞 |
细胞较小,核蓝色小而圆;细胞质较少呈蓝紫色 |
单核细胞/巨噬细胞 |
细胞较大,细胞核蓝色大而圆;细胞质浅蓝紫色 |
样本准备方法及送样运输要求(为保证染色成功率,血液、肺泡灌洗液、骨髓样本建议客户按以下方法自行涂片固定后送样):
1.涂片的制作方法:
1.1 血涂片制备:
(1)取新鲜血液(若用抗凝管收集的血液,放置最好不要超过24h,否则血液中白细胞的数量以及种类会明显减少),选用干净的粘附玻片,用移液枪吸取10ul的血液,滴加在玻片的一侧(一般都是磨砂对侧)。
(2)再取一片辅助玻片(也可选用盖玻片,依据个人手的力道习惯选择),以45°角将其宽边靠近血液,血液沿着接触边缘向两边晕开,当两边都到达边缘时,轻轻地稳健且匀速地推向磨砂面一侧,进行涂片,然后快速果断地拿走载玻片。可见涂片首尾分明,厚薄均匀。(一般情况下,涂抹速度力道适中的话,取走玻片时载玻片上的血几乎无残留,且涂抹出的血涂片无明显细胞破碎,变形。在显微镜下可观察到细胞呈单个紧密排列,整体比较均匀。)
(3)自然晾干后,用甲醇浸泡固定15min,自然晾干后4℃保存运输。
1.2 肺泡灌洗液和骨髓涂片制备:
(1)取细胞悬液,2800r 4℃离心5min去上清。若沉淀红色较多,则需要用红细胞裂解液(G2015)裂解红细胞。细胞沉淀加入红细胞裂解液200ul,涡旋混匀,放在冰上裂解2min后加入1ml PBS终止裂解。2800r 4℃离心5min去上清后加PBS重悬。若沉淀红色不多,则不需要裂解红细胞,直接弃上清液,加PBS重悬。根据细胞沉淀量对应加入PBS:
①若肉眼观察无明显细胞沉淀,直接加入50ul PBS,用移液枪吹打混匀后,涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的小圆圈中(3cm×2cm的椭圆);
②若细胞沉淀量为绿豆大小,加入200ul PBS,用移液枪吹打混匀后,吸取50ul,涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的小圆圈中(3cm×2cm的椭圆);
③若细胞沉淀量很多,黄豆大小或更大,加入1ml PBS,用移液枪吹打混匀后,吸取150ul,涂于粘附载玻片上提前用组化笔画好的大圆圈中(最大长边约5cm,最大短边约2cm的椭圆)。在显微镜下观察细胞量的多少,若还是过厚,再用PBS对倍稀释该细胞悬液,直至在显微镜下观察到细胞量涂布均匀。
(2)用移液枪将细胞悬液铺满整个圆圈,涂片放置自然晾干(因细胞未经固定,不可通过烘箱加快晾干)。
(3)将晾干后的涂片放入丙酮中浸泡固定1min,自然风干,4℃保存运输。
2. 石蜡切片常温运输,冰冻切片-20℃运输。
样本种类 |
预处理过程 |
固定条件 |
保存运输条件 |
备注 |
血液 |
5-10ul血液涂片 |
甲醇固定15min后自然晾干 |
4℃保存运输 |
血液要用抗凝管采集,取血后立即涂片固定 |
肺泡灌洗液,骨髓 |
50-150ul细胞悬浮液涂片
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丙酮固定1min后自然晾干
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4℃保存运输 |
样品中红细胞较多需要裂解红细胞,取样后立即涂片固定
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