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NASH小鼠模型小鼠检测

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发布时间：2025-04-19 09:12:23 更新时间：2025-05-13 18:11:48

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作者：中科光析科学技术研究所检测中心

NASH小鼠模型小鼠检测的重要性和背景介绍

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）作为代谢综合征在肝脏的主要表现，已成为全球慢性肝病的重要诱因。由于缺乏有效的临床治疗药物，建立可靠的NASH小鼠模型并对其进行系统性检测，成为研究疾病机制、评估药物疗效的核心手段。NASH小鼠模型通过模拟人类病理特征（如脂肪变性、炎症浸润和纤维化），为揭示脂质代谢紊乱、氧化应激及免疫调控机制提供关键平台。检测内容涵盖生理指标、组织病理学、分子生物学及代谢功能评估，其结果直接影响实验数据的可靠性和转化医学价值。尤其在药物研发中，精准的模型检测可显著缩短候选化合物筛选周期，降低临床试验风险。

具体的检测项目和范围

NASH小鼠模型的检测体系包括：（1）生理指标：体重变化、肝指数（肝重/体重比）、血糖及胰岛素耐受；（2）组织病理学：肝组织苏木精-伊红（H&E）染色评估脂肪变性及炎症，天狼星红染色（Sirius Red）或Masson染色量化纤维化程度；（3）分子生物学检测：肝脏炎症因子（如TNF-α、IL-6）、氧化应激标志物（MDA、SOD）、纤维化相关基因（Collagen I、α-SMA）表达量；（4）代谢功能评估：血清ALT/AST活性、血脂谱（TG、TC、LDL-C/HDL-C）、游离脂肪酸（FFA）浓度。此外，部分研究需结合Micro-CT检测肝脏脂质分布或活体成像技术追踪炎症动态。

使用的检测仪器和设备

检测过程涉及多种精密仪器：（1）全自动生化分析仪（如Hitachi 7020）用于测定血清ALT/AST及血脂指标；（2）病理切片系统（Leica RM2235）配合数字病理扫描仪（Hamamatsu NanoZoomer）完成组织切片制备与图像分析；（3）实时荧光定量PCR仪（ABI QuantStudio 5）检测基因表达；（4）酶标仪（SpectraMax M5）分析ELISA试剂盒数据；（5）小动物代谢笼系统（TSE PhenoMaster）监测能量代谢参数；（6）激光共聚焦显微镜（Zeiss LSM 900）观察免疫荧光标记结果。关键设备需定期校准，确保检测灵敏度（如ALT检测限需≤5 U/L）。

标准检测方法和流程

标准化检测流程包括以下步骤：1）模型构建期：采用高脂高胆固醇饲料（如D09100301配方）联合果糖饮水诱导16-24周；2）样本采集：麻醉后心脏取血分离血清，肝组织分为三部分（固定于4%多聚甲醛、液氮速冻及RNA保存液）；3）病理处理：石蜡包埋切片厚度4μm，H&E染色按Grading标准区分脂肪变性程度（0-3级），天狼星红染色量化纤维面积（ImageJ分析）；4）分子检测：RT-qPCR采用ΔΔCt法计算基因相对表达量，引物需跨外显子设计；5）数据分析：采用NAS评分系统（NAFLD Activity Score）整合脂肪变性、气球样变和炎症评分，纤维化分期参照Ishak改良标准。

检测结果的评判标准

模型有效性评判依据多参数整合：1）病理学层面：脂肪变性面积占比＞10%、NAS总分≥5分且纤维化分期≥F1；2）生化指标：血清ALT＞50 U/L、AST＞60 U/L，TG＞150 mg/dL；3）分子标志物：肝脏TNF-α mRNA表达上调2倍以上，Collagen I蛋白阳性面积＞5%；4）功能验证：胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）＞8.0，肝脏FFA含量＞2.5 μmol/g。需注意品系差异（如C57BL/6J小鼠较易诱导纤维化），且高脂饮食周期与病理严重程度需呈显著相关性（r＞0.7）。联合检测结果应通过主成分分析（PCA）验证模型组与对照组的显著分离。