狂犬病毒纯化原液检测技术规范

狂犬病毒纯化原液作为疫苗生产的关键中间体，其质量直接影响疫苗的安全性和有效性。根据WHO《狂犬病疫苗生产规程》及中国药典要求，原液需经过严格的质量控制程序，确保病毒抗原含量、纯度、活性及生物安全性符合标准。该检测项目贯穿疫苗研发、生产质控及上市后监管全周期，可有效预防因病毒灭活不彻底或杂蛋白残留引发的免疫失败或过敏反应。特别是在暴露后预防疫苗的生产中，原液检测数据更是决定疫苗保护效力的核心参数。

检测项目与范围

检测项目涵盖物理化学特性、生物学特性及安全性三大维度：

1. 病毒滴度检测（TCID₅₀法）
2. 抗原含量测定（ELISA法）
3. 蛋白质纯度分析（SDS-PAGE电泳）
4. 宿主细胞DNA残留量（荧光定量PCR）
5. 细菌内毒素检测（鲎试剂法）
6. 无菌检查（薄膜过滤法）
7. 异常毒性试验（小鼠法）
检测范围覆盖病毒培养收获液经超滤浓缩、柱层析纯化后的原液，重点监测纯化工艺的稳定性和批次间一致性。

检测仪器与设备

主要使用以下专业仪器：
• 生物安全柜（Class II A2型）
• 荧光显微镜（带CCD成像系统）
• 实时荧光定量PCR仪（ABI 7500）
• 酶联免疫检测仪（Mtiskan FC）
• 高效液相色谱仪（Waters e2695）
• 凝胶成像系统（Bio-Rad ChemiDoc）
• 细菌内毒素测定仪（Endosafe Nexgen-PTS）
关键设备需定期执行IQ/OQ/PQ验证，并建立完整的计量校准记录体系。

标准检测方法与流程

以病毒滴度检测为例，执行依据《中国药典》三部通则：
1. 制备Vero细胞单层（96孔板，80%融合度）
2. 10倍梯度稀释样品（从10^-3至10^-10）
3. 每稀释度接种8孔，37℃培养5-7天
4. 荧光抗体染色法判定感染孔
5. 按Reed-Muench法计算TCID₅₀
流程控制需严格执行生物安全三级实验室（BSL-3）操作规范，所有废弃物需121℃高压灭菌30分钟。

技术标准与规范

执行标准包括：
• WHO TRS 1011《狂犬病疫苗生产规程》
• 《中国药典》2020年版三部"人用狂犬病疫苗"项
• CPMP/BWP/243/96《欧洲药典病毒疫苗生产指南》
• 21 CFR 610.12（美国FDA生物制品无菌标准）
• ISO 13485:2016医疗器械质量管理体系要求

检测结果评判标准

关键质量指标要求：
• 病毒滴度：≥6.5 lg TCID₅₀/mL
• 抗原含量：≥5 IU/mL（ELISA法）
• 宿主DNA残留：≤10 ng/剂量
• 蛋白质纯度：SDS-PAGE主带占比≥90%
• 内毒素：≤5 EU/mL（鲎试剂动态浊度法）
任何检测项目不合格均需启动OOS调查程序，追溯至前3个生产批次并进行工艺偏差分析。

检测机构资质证书

CMA认证

检验检测机构资质认定证书

证书编号：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS认可

实验室认可证书

证书编号：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO认证

质量管理体系认证证书

证书编号：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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