小鼠脑脊液与淋巴结检测
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发布时间:2025-05-06 20:27:23 更新时间:2025-05-27 23:00:57
点击:0
作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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小鼠脑脊液与淋巴结检测是神经免疫学研究中的关键性检测项目,在神经退行性疾病、中枢神经系统感染、自身免疫性脑炎等研究领域具有重要价值。脑脊液作为中枢神经系统的"液态窗口",其生化成分和免疫指标变化可直接反映血脑屏障的完整性和神经炎症状态;而淋巴结作为次级淋巴器官,在神经-免疫交流中扮演重要角色。近年来,随着神经免疫学研究的深入,发现脑脊液与淋巴结之间存在动态的免疫细胞迁移通路,这一"脑-淋巴系统"的发现为多种神经系统疾病的研究提供了新视角。通过同步检测这两个部位的生化指标和免疫参数,研究人员能够更全面地评估神经炎症程度、追踪免疫细胞迁移路径、评价药物透过血脑屏障的效果,为阿尔茨海默病、多发性硬化症等神经系统疾病的机制研究和治疗开发提供重要实验依据。
本检测项目主要包括以下内容:1) 脑脊液检测:蛋白质浓度测定(总蛋白、特定蛋白如β-淀粉样蛋白)、细胞计数与分类(白细胞亚群分析)、炎症因子检测(IL-1β、IL-6、TNF-α等);2) 淋巴结检测:免疫细胞表型分析(流式细胞术检测T细胞、B细胞、DC细胞等亚群)、细胞因子分泌谱、组织病理学检查;3) 脑脊液-淋巴结关联分析:荧光标记细胞追踪、特异性抗体检测等。检测范围涵盖C57BL/6等常用实验小鼠品系,适用于各类神经炎症模型、自身免疫模型和神经退行性疾病模型。
检测过程涉及多种精密仪器:1) 脑脊液采集使用显微操作仪(如Narishige MN-153)配合微量注射器(Hamilton 701RN);2) 细胞计数采用自动细胞计数器(如Bio-Rad TC20)或流式细胞仪(BD FACSVerse);3) 蛋白检测使用酶标仪(BioTek Synergy H1)和蛋白电泳系统(Bio-Rad Mini-PROTEAN);4) 淋巴结处理需要组织匀浆器(Precellys 24)和低温离心机(Eppendorf 5424R);5) 显微观察配备荧光显微镜(Olympus BX53)和共聚焦显微镜(Zeiss LSM 880);6) 分子检测采用实时荧光定量PCR仪(Applied Biosystems 7500)。
标准检测流程分为三个阶段:1) 样本采集阶段:小鼠麻醉后,在立体定位仪固定下,通过枕大池穿刺采集5-10μL脑脊液(避免血液污染),同时无菌摘取颈深部淋巴结和腰淋巴结;2) 样本处理阶段:脑脊液立即离心(300g,10min,4℃)分离上清与细胞沉淀,淋巴结经机械分散制备单细胞悬液或OCT包埋冰冻切片;3) 检测分析阶段:a) 脑脊液蛋白检测采用BCA法或ELISA,细胞计数使用Neubauer计数板,b) 淋巴结免疫细胞分析通过表面标志物(CD3、CD19、CD11c等)进行流式分型,c) 细胞迁移实验采用CFSE或量子点标记追踪技术。整个流程需在生物安全柜内完成,保持4℃低温环境。
检测过程遵循多项国际标准:1) 动物福利方面严格执行AAALAC认证标准和ARRIVE指南2.0版;2) 样本采集参照《小鼠脑脊液采集技术规范》(J Neurosci Methods, 2015);3) 流式细胞分析遵循ISAC的MIFlowCyt标准;4) 细胞因子检测采用Milliplex多因子检测技术,符合MIATA报告规范;5) 组织处理依据NIH的《实验动物组织采集与保存指南》;6) 数据分析遵循FCMP(Flow Cytometry Metadata Package)标准。所有操作均在ISO 9001质量体系下进行,实验记录符合GLP规范。
检测结果从三个维度进行评判:1) 质量控标准:脑脊液样本血红蛋白含量<10ng/mL(排除血污染)、淋巴结细胞活性>90%;2) 定量标准:a) 脑脊液总蛋白正常参考值范围200-400mg/dL(品系差异需注明),白细胞计数<5个/μL,b) 淋巴结T/B细胞比值(1.5-2.5:1)及DC细胞占比(1-3%);3) 病理评判标准:a) 采用半定量评分系统(0-3级)评估淋巴结生发中心形成和细胞浸润程度,b) 脑脊液特异性蛋白(如Aβ42)水平较对照组变化≥20%视为有统计学意义。所有数据需经过三次独立实验验证,采用GraphPad Prism进行ANOVA分析,p<0.05认为差异显著。
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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