肝纤维化小鼠模型是评价肝损伤进程与抗纤维化干预效应的核心实验体系，常用诱导方式四氯化碳、胆管结扎、高脂饲料及 HBV 相关等途径。围绕该模型的检测覆盖血清肝功能、纤维化血清标志物、肝组织病理分期、炎症因子与免疫细胞亚群、信号通路分子及铁代谢指标等多个维度。系统化检测可还原纤维化进程全景，为药效评价与机制研究提供数据支撑。
肝纤维化模型检测概述
肝纤维化小鼠模型的检测以“造模验证—损伤评估—机制解析”为主线。CCl4 诱导模型以肝毒性反复刺激形成纤维化，高脂饮食诱导模型对应代谢相关脂肪性肝纤维化进程，酒精与胆汁淤积性模型则分别对应不同病因通路。检测体系须覆盖肝功能、纤维化程度、炎症免疫状态及分子通路四个层面，据此判定造模是否成功以及干预措施的评价方向。转录组学比较研究提示，不同诱导方式的分子表型差异明显，检测方案应依据模型类型组合相应指标。
模型样本采集与制备
样本制备质量直接决定后续检测的可靠性。血清样本于末次造模刺激后规定时间点采血，离心分离后分装冻存，避免反复冻融导致酶活性下降。肝组织取材须在统一解剖部位切块，分别固定于中性福尔马林用于病理染色、速冻用于核酸与蛋白提取。用于流式分析的肝单细胞悬液需经灌流清除血细胞后酶解制备，全程低温操作以维持细胞活性。取样时间点、部位与处理方式须在各组间保持一致，以控制批次间变异。
血清肝功能指标检测——分光光度法
血清肝功能检测采用分光光度法，依托自动生化分析仪完成。常规指标丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST），二者升高幅度反映肝细胞膜损伤程度；AST/ALT 比值可用于辅助判断损伤进展倾向。碱性磷酸酶（ALP）与总胆红素对应胆汁淤积性损伤，白蛋白水平则反映肝脏合成功能储备。试剂盒反应体系经 37℃ 孵育后于特定波长读取吸光度，依据标准曲线换算酶活性浓度。药效评价研究中，该组指标常用于量化复方灵丹胶囊等干预措施对肝功能的改善幅度。
纤维化血清标志物检测——ELISA法
血清纤维化标志物检测采用双抗体夹心 ELISA 法，指标涵盖透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、III 型前胶原（PCIII）与 IV 型胶原（IV-C），构成纤维化四项联合评估组合。样本加样后依次经历孵育、洗涤、酶标二抗结合与底物显色步骤，酶标仪读取 OD 值后依标准曲线定量。ELF 相关分子在模型肝组织中的表达检测亦可延伸至组织裂解液体系，用于评估细胞外基质沉积程度。血清标志物适用于动态监测，与病理分期结果联合解读可提高纤维化程度判定的准确性。
肝组织病理染色与纤维化分期
病理学评估是纤维化分期的金标准。石蜡切片常规开展苏木精-伊红（HE）染色评估炎症坏死与肝小叶结构改变，Masson 染色与天狼星红染色显示胶原沉积分布。依据 Ishak 或 METAVIR 评分体系，由病理读片人员对纤维化程度实施分级分期判定。天狼星红偏振光染色可进一步区分 I 型与 III 型胶原。图像分析系统对阳性染色面积实施定量，以纤维化面积百分比作为客观参数。脂肪性肝纤维化模型须同步开展油红 O 或 HE 脂变评估，以区分脂肪变性程度与纤维化程度的各自贡献。
炎症因子与免疫细胞亚群检测
炎症与免疫检测解析纤维化的免疫机制。血清或肝组织匀浆中 TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-17 等炎症因子采用 ELISA 定量；Th22 细胞等淋巴细胞亚群比例经流式细胞术检测，以表面标志与胞内因子染色联合设门分析。肝脏巨噬细胞与淋巴细胞亚群变化对应纤维化进程中的免疫细胞招募与极化状态，疤痕相关巨噬细胞的表型分型可经流式或免疫荧光实现。miR-200a 等微小 RNA 表达检测可补充免疫调控层面的信息，多采用 qPCR 法完成。
信号通路相关分子检测——PCR法
Hedgehog、TGF-β/Smad 等通路的活化状态与纤维化进程密切相关。检测采用实时荧光定量 PCR：组织总 RNA 经提取与纯度鉴定后逆转录为 cDNA，以特异性引物扩增目的基因，内参基因归一化后计算相对表达量。检测对象α-SMA、Col1a1、TGF-β1、Gli1 等纤维化相关分子，可评价经血来源间充质干细胞移植或中药单体干预后的通路调控效应。PCR 结果须与 Western blot 或免疫组化蛋白层面数据互相印证，避免单一层面解读偏差。
铁代谢指标联检方案
铁代谢紊乱参与肝纤维化的进程调控。联检方案血清铁、铁蛋白、转铁蛋白的生化测定，以及肝组织铁调素（Hepcidin）与膜铁转运蛋白的 mRNA 及蛋白表达检测。组织铁沉积经普鲁士蓝染色定位与半定量评估。铁调素表达采用 qPCR 与免疫组化双层面检测，以还原铁稳态调控状态。CCl4 诱导模型中铁与铁调素的动态变化可反映铁负荷与纤维化程度的关联，铁代谢指标宜与纤维化标志物同步采样、联合解读。
检测性能指标与质量控制
各检测模块须建立对应的质量控制要求。分光光度法以定值质控血清监控批内与批间精密度；ELISA 须保证标准曲线拟合度符合要求，双孔复测取均值；qPCR 以熔解曲线与扩增效率判定反应特异性；病理读片实行双人独立评分并核对一致性。流式检测须设置同型对照与荧光补偿。多批次实验应随机分配样本检测顺序，关键指标设置技术重复。原始数据完整留存，保证可溯源。
检测结果判定与科研应用场景
结果判定采取多指标联合模式：造模成功判定须同时满足血清转氨酶升高、纤维化血清标志物上升及病理分期达到预设级别。科研应用涵盖抗纤维化药物筛选（如中药复方、黄芪甲苷Ⅳ、胸腺素β4 等活性成分的药效评价）、HBV 相关及脂肪性肝纤维化的表型深度分析、转录组学与通路机制研究等场景。干预效果以各项指标相对于模型组的回调幅度量化，据此完成药效排序与机制假说构建，服务于肝纤维化防治研究的全程数据需求。
