支气管哮喘小鼠模型是以卵清蛋白（OVA）等抗原致敏激发构建的气道炎症研究载体，检测覆盖建模方案设计、支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞分类、IL-4/IL-5/IFN-γ等炎症因子ELISA定量、肺组织HE染色病理评估、气道高反应性测定及HMGB1、p38 MAPK等信号分子表达分析。围绕模型建立与评价的完整链条，可系统获取免疫、病理与功能三类指标，为哮喘机制研究与药效评价提供规范化检测数据。
检测服务
本检测服务面向OVA致敏的嗜酸粒细胞性哮喘模型与中性粒细胞性哮喘模型两类对象，提供从造模、样本采集到多终点检测的一体化方案。检测模块包含BALF细胞学、细胞因子谱、肺组织形态学、气道阻力功能学及分子表达分析，覆盖气道炎症、气道血管再生与重塑、激素抵抗等多个研究方向的样品需求。委托方可选择整体外包，亦可仅送检灌洗液、血清、肺组织等已采集样本，检测周期与项目组合依据实验设计确定。
建模方法与致敏方案
经典方案采用OVA联合氢氧化铝佐剂腹腔注射致敏，随后经雾化激发建立气道炎症。不同剂量卵清蛋白诱导可形成炎症强度各异的模型梯度，高剂量短程激发倾向嗜酸粒细胞浸润，联合脂多糖或其他佐剂调整则可诱导以中性粒细胞为主的表型。糖皮质激素抵抗型模型可经反复激素干预筛选获得。检测环节须同步设置正常对照组与激发对照组，以排除佐剂本身对细胞因子与病理指标的干扰，保证各组间可比性。
样本类型与采集处理
常规采集样本BALF、血清、外周血、肺组织及脾脏单个核细胞。BALF以预冷磷酸盐缓冲液分次灌洗回收，离心后上清分装冻存用于细胞因子与HMGB1检测，细胞沉淀重悬后用于分类计数。肺组织分为三份：一份4%多聚甲醛固定供HE染色，一份液氮速冻供RNA与蛋白提取，一份石蜡包埋备用。血清采集后静置离心分装，避免反复冻融。全血经抗凝处理后可用于Th1/Th2流式分群检测。
BALF细胞分类与计数
细胞沉淀取样后行涂片或细胞甩片，瑞氏-吉姆萨染色后镜下计数嗜酸粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞与淋巴细胞比例，同时以血球计数板或自动细胞计数仪测定灌洗液总细胞数。该模块是判定模型表型的首要依据：嗜酸粒细胞比例升高对应经典Th2型炎症，中性粒细胞比例升高则提示中性粒细胞性表型。计数须由双人盲法阅片，每张涂片分类计数不少于规定视野数，并对细胞溶解样本予以剔除或备注。
炎症因子ELISA检测——IL-4/IL-5/IFN-γ
取BALF上清、血清或肺组织匀浆上清，采用双抗体夹心ELISA试剂盒定量检测IL-4、IL-5与IFN-γ。检测流程依次为加样孵育、洗涤、酶标二抗结合、底物显色与终止，酶标仪读取吸光度后依标准曲线四参数拟合计算浓度。Th2型因子IL-4、IL-5升高与IFN-γ相对不足是哮喘模型免疫偏移的核心证据，IFN-γ/IL-4比值可用于评估Th1/Th2平衡状态。样本须做复孔，浓度超出线性范围时须稀释后复测。
肺组织病理与HE染色评估
固定肺组织经脱水、石蜡包埋、切片（约4μm）后行HE染色，镜下评估支气管周围炎症细胞浸润、上皮损伤、黏液栓形成及气道壁与血管壁增厚程度。气道血管再生与重塑评估可结合血管密度观察指标，按半定量评分法对炎症浸润、上皮改变与平滑肌增厚分别分级。阅片采用盲法，每只动物选取同级支气管截面，记录代表性图像。该项与BALF细胞学互为印证，用于判定炎症与重塑的形态学证据。
气道高反应性测定方法
功能学检测采用有创肺功能测定系统，麻醉气管插管后予递增剂量乙酰甲胆碱雾化激发，记录气道阻力与肺顺应性变化，绘制剂量-反应曲线并以曲线下面积比较组间差异。无创体容积描记法亦可监测气道增强间歇等参数，适用于纵向观察。检测前须确认基础阻力稳定，激发剂量序列须统一。该指标反映模型的功能表型，为评价药物对气道反应性的干预提供客观终点。
信号通路蛋白PCR与Western blot检测
取冻存肺组织提取总RNA，反转录后以荧光定量PCR检测HMGB1、p38 MAPK、维生素D相关分子（VDR、CYP27B1等）及候选靶基因的mRNA相对表达，以内参基因归一化。蛋白水平检测采用Western blot：组织裂解、BCA定量、SDS-PAGE分离、转膜后特异性抗体孵育，ECL显色并以凝胶成像系统分析条带灰度。研究提示HMGB1与p38 MAPK表达变化与哮喘气道炎症相关，可作药物干预机制的检测指标。核蛋白与磷酸化蛋白检测须配相应裂解条件。
血清IgE与OVA特异性抗体联检
采用ELISA检测血清总IgE与OVA特异性IgE、IgG1、IgG2a。总IgE以双抗体夹心法直接定量；特异性抗体以OVA包被板捕获后经酶标二抗显色测定，结果以吸光度或标准品校准浓度表示。IgE与IgG1升高反映Th2优势应答，IgG2a水平变化提示Th1应答强度，二者比值可用于判断免疫偏移方向。血清样本须避免溶血与脂浊干扰，复孔偏差超出允许范围时须重新检测。
检测报告指标与判定标准
检测报告逐项列明BALF总细胞数与分类比例、各细胞因子浓度、血清抗体水平、病理半定量评分、气道阻力曲线参数及目标基因与蛋白的相对表达量，附原始图像与标准曲线信息。模型成立判定通常综合以下证据：BALF嗜酸粒细胞或中性粒细胞比例升高、IL-4/IL-5升高、血清IgE升高、支气管周围炎症浸润及气道阻力增强。受试物干预效果依据各指标组间统计学比较结论表述，报告不对药效机制作推断性陈述。
