放射性肺纤维化小鼠模型是评估辐射致肺损伤及药物干预效应的核心实验体系。围绕该模型，可开展的检测覆盖建模造模、样品采集、病理形态学、炎症因子定量、纤维化标志物联检、蛋白与基因表达、小动物CT影像评估等模块。检测对象小鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液、血清及切片标本，指标体系贯穿胶原沉积、TGF-β信号通路与影像学参数，据此还原肺纤维化进程的全景，支撑药效评价与机制研究。
检测服务概述
本服务以放射性肺纤维化小鼠为检测对象，面向放射损伤防护药物、抗纤维化候选化合物及细胞治疗产品的药效评价需求。检测范围涵盖模型构建质量确认、肺组织病理形态学分析、炎症与纤维化相关细胞因子定量、信号通路蛋白及 mRNA 表达检测、活体影像学评估等环节。样品类型新鲜肺组织、石蜡切片、冰冻切片、灌洗液与血清。全部项目依托通用标准方法建立，结果以多维度指标交叉验证方式出具，适用于各类干预样品的疗效比较研究。
模型构建与样品制备
模型构建常规采用雌性或雄性 C57BL/6 小鼠，麻醉后固定于定位装置，以小动物X射线辐照仪对单侧或全肺实施局部照射，屏蔽胸腺及心脏等非靶区组织。照射后分周期取样，对应放射性肺损伤的炎症期与纤维化期。样品制备要点如下：肺组织经支气管灌注固定后脱水、石蜡包埋，用于HE与Masson染色；另一部分肺叶液氮速冻保存，用于蛋白与核酸提取；血清与支气管肺泡灌洗液分装冻存，用于细胞因子测定。取样时机与部位须严格一致，以规避个体间变异。
辐照条件与剂量设计
剂量设计是模型成立的关键变量。依据文献通用做法，采用单次高剂量照射诱导稳定纤维化表型，剂量范围与剂量率由委托方确认后在方案中固定。照射野定位须结合影像或体表标志复核，保证双侧肺野受照均匀。照射当日以辐射剂量仪复核实际输出剂量，记录偏差。剂量分组建议包含假照对照、模型组与干预组，各组照射参数完全一致。必要时设置不同剂量梯度，用于建立剂量-效应关系曲线，支撑后续CT参数相关分析。
HE与Masson染色病理检测
病理染色直接反映肺泡结构破坏与胶原沉积程度。HE染色用于观察肺泡壁增厚、炎性细胞浸润、肺泡腔渗出及结构塌陷范围，据此判定炎症期损伤等级。Masson染色使胶原纤维呈蓝色，可半定量评估肺间质胶原沉积面积。检测流程切片脱蜡至水、染色、分化、脱水透明与封片。结果判读采用盲法评分，由两名以上读片人员独立完成。图像经全自动玻片扫描系统采集，配合形态学分析软件计算胶原阳性面积占比，作为纤维化程度的形态学定量指标。
ELISA法测定炎症因子含量
炎症期检测以细胞因子定量为核心。取血清或肺组织匀浆上清，采用双抗体夹心ELISA法测定TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子含量。操作要点为：标准品梯度稀释建立标准曲线，样品设复孔，加样后经孵育、洗板、显色与终止步骤，酶标仪读取吸光度并按曲线换算浓度。匀浆制备须统一蛋白浓度校正方式，结果以单位总蛋白折算表达。若考察巨噬细胞M2型极化相关指标，可增测相应趋化因子与IL-10水平。批内与批间变异须在方法学可接受范围内，复孔偏差超出限度时复测。
TGF-β1/β3及羟脯氨酸联检
TGF-β信号是纤维化评估的主线指标。肺组织匀浆中TGF-β1含量采用ELISA法测定，TGF-β3可同步检测以比较两者在病程中的差异动态。羟脯氨酸作为胶原特征性氨基酸，其含量直接反映肺组织总胶原水平。测定采用碱水解或酸水解法处理肺组织，水解液经氯胺T氧化显色后以分光光度法比色定量，或选用酶法试剂盒完成。三项指标联检可形成互补验证：TGF-β提示通路激活强度，羟脯氨酸提示胶原沉积总量，二者结合病理染色结果交叉印证纤维化程度。
Western blot与qPCR蛋白基因检测
通路层面检测采用Western blot与实时荧光定量PCR并行方案。蛋白检测提取肺组织总蛋白，经SDS-PAGE电泳分离、转膜、封闭、一抗二抗孵育与化学发光显色，测定TGF-β1、α-SMA、I型胶原、p-Smad2/3及内参蛋白表达。基因检测提取总RNA，逆转录为cDNA后以SYBR荧光法进行qPCR扩增，测定Col1a1、Tgfb1、Acta2等靶基因mRNA相对表达量，采用2^-ΔΔCt法计算。两种方法结果相互印证，用于判断干预样品对纤维化通路的调控方向与强度。
小动物CT影像学评估
活体影像评估实现同一动物纵向追踪。小鼠麻醉后于呼气末屏气采集肺部CT图像，层厚与曝光参数按小动物成像规范设定。定量分析肺容积、肺密度均值、高密度病灶体积占比及CT值分布直方图等参数。纤维化区域因胶原沉积与实变表现为局部密度升高，与病理染色结果存在对应关系。影像参数与照射剂量间可建立剂量-效应回归模型，用于量化不同干预条件下的肺损伤程度。该模块的优势在于无创、可重复，减少动物用量并保留个体内动态数据。
检测流程与周期交付
标准流程为：方案确认与分组设计、模型构建与照射、造模后分周期取样、多平台并行检测、数据汇总与报告出具。周期取决于观察终点设置：炎症期终点通常安排在照射后早期取样，纤维化终点须等待胶原充分沉积后取样，具体周龄在方案阶段约定。样品接收后，病理染色、ELISA、分子检测与影像评估各模块并行推进。交付物原始图像、定量数据表、标准曲线与扩增曲线、影像重建文件及完整检测报告，报告附方法学说明与结果解读。
检测性能指标与判定标准
方法性能以精密度、重复性与线性范围界定。ELISA标准曲线相关系数、qPCR扩增效率、复孔与复孔间偏差均须符合各方法通用可接受限。病理评分采用双人盲法读片，组内一致性以统计学方法核对。判定标准为多指标联合结论：模型成立以病理纤维化评分升高、羟脯氨酸含量增加、TGF-β1表达上调及CT高密度改变同时出现为准；干预有效性的评估依据各给药组与模型组的组间统计学比较结果。单指标异常不作为独立判定依据，须结合整体数据谱系综合判断。
