输血相关急性肺损伤（TRALI）小鼠模型是研究输血不良反应机制与干预手段的核心实验载体。围绕该模型，本检测体系覆盖造模验证、肺组织病理学评价、ELISA炎症因子定量、血气与肺功能指标、流式细胞术免疫表型分析、铁死亡与氧化应激、补体及抗体水平等多个模块。各模块按样品制备、方法选择、指标解读的步骤展开，可用于药物干预评价与输血安全研究。
检测服务
本检测服务面向TRALI小鼠模型的成模评价与干预效果验证，服务于输血安全机制研究、血小板相关病理研究及细胞因子干预评价等科研场景。可承接的样品肺组织、支气管肺泡灌洗液、外周血、血浆血清及单个核细胞悬液。检测平台涵盖病理切片系统、酶标仪、流式细胞仪、血气分析仪与分光光度计。客户可依据实验设计选取单项指标或联检组合，检测方案按样品类型与目的指标预先确认后执行。
模型建立与造模方法
TRALI模型常采用抗体介导法构建，即经尾静脉输注针对主要组织相容性复合物Ⅰ类或Ⅱ类抗原的单克隆抗体，诱发急性肺损伤。两步法模型先以脂多糖预激，再输注抗体，以增强损伤表型的重现性。此外，陈旧血小板输注、异基因耐受性树突状细胞来源外囊泡体输注亦可作为诱发途径，用于模拟不同输血成分相关的损伤场景。造模后须设置同型抗体对照与假手术对照，并记录体重、呼吸频率与死亡率，据此评估成模稳定性。
样本类型与采集处理
样品采集须在造模后预设时间窗内完成。外周血经眼眶或腹主动脉采血，肝素或EDTA抗凝管分离血浆用于细胞因子检测，促凝管分离血清用于抗体与补体检测。肺组织分为四份：一份固定于多聚甲醛用于石蜡切片；一份称湿重后烘干测干重；一份匀浆用于氧化应激与铁死亡指标测定；一份制备单细胞悬液用于流式分析。支气管肺泡灌洗液经气管插管生理盐水灌洗回收，离心后取上清测定蛋白含量与炎症因子，细胞沉淀用于分类计数。全部样品低温暂存并避免反复冻融。
肺组织病理学检测——HE染色与肺湿干重比
HE染色用于评价肺损伤的形态学特征。石蜡切片脱蜡水化后行苏木精伊红染色，镜下观察肺间质水肿、肺泡腔渗出、中性粒细胞浸润与肺泡壁增厚等改变，按分级评分法对损伤程度进行半定量。肺湿干重比（W/D）为肺水肿的客观量化指标，取材后即刻称取湿重，置恒温烘箱至恒重后称取干重，计算比值。比值升高提示血管通透性增加与肺水肿形成。两项指标相互印证，构成模型成模判定的基础证据。
炎症因子检测——ELISA法测定IL-17A、IL-2等
采用双抗体夹心ELISA法测定血浆、血清或肺组织匀浆中细胞因子浓度。检测指标可覆盖IL-17A、IL-2、IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-35等。操作流程包被捕获抗体、加样孵育、酶标二抗结合与底物显色，酶标仪读取吸光度后依据标准曲线换算浓度。IL-17A水平可反映中性粒细胞趋化相关炎症通路活性；IL-2及IL-2抗体复合物的定量用于调节性T细胞功能研究的分组判定。每块板须设复孔与标准品梯度，批内批间变异须在方法学允许范围内。
血与肺功能指标测定
血气分析用于评估气体交换功能。肝素抗凝动脉血在采血后即刻上机，测定氧分压、二氧化碳分压与pH，氧合下降为肺损伤的功能学佐证。呼吸功能测定可采用小动物体描系统，记录呼吸频率、潮气量与气道阻力变化。血浆总蛋白与白蛋白测定用于评估血管内蛋白渗漏程度。上述功能指标与病理评分联合分析，可从形态与功能两个层面还原损伤严重程度，为干预效果判定提供量化维度。
流式细胞术检测中性粒细胞与血小板聚集
流式细胞术用于分析外周血与肺组织中免疫细胞的构成变化。抗凝全血经红细胞裂解后，以CD45、Ly6G标记中性粒细胞，CD41或CD61标记血小板，检测中性粒细胞血小板聚集体比例，该指标反映血小板介导的损伤通路活化状态。肺组织经酶消化制备单细胞悬液，可进一步分析巨噬细胞、中性粒细胞与T细胞亚群占比。调节性T细胞以CD4、CD25、Foxp3组合标记，用于IL-2复合物等干预研究的表型验证。检测全程须设同型对照与荧光单染管。
铁死亡与氧化应激指标检测
铁死亡相关指标按分光光度法与相应试剂盒流程测定。肺组织匀浆测定铁离子含量、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）活性；比色法或酶法均可适用，操作时须严格控制匀浆蛋白定量以归一化结果。铁死亡抑制剂的干预研究须同步设置载体对照。qPCR与Western blot可补充测定GPX4、ACSL4等铁死亡调控分子的表达水平。各指标联合应用，可区分脂质过氧化损伤与经典炎症性损伤的贡献比例。
补体及抗体水平检测
补体活化检测采用ELISA测定血清C3a、C5a等裂解片段浓度，也可行补体总活性测定。抗体介导模型中，须对输注抗体的血浆浓度进行定量，采用流式细胞术或ELISA检测抗H-2类抗原抗体的滴度与持续时间。免疫复合物沉积可经肺组织免疫荧光染色定位分析。补体水平与病理评分的相关性分析有助于判断补体级联在发病中的参与程度。样品须避免体外补体活化，采血后低温离心并尽快分装冻存。
检测项目联检方案与科研应用场景
联检方案按研究目的配置。基础成模验证推荐HE染色联合W/D比值与血气分析；机制研究可增补ELISA炎症因子组合、流式免疫表型与铁死亡指标；干预评价须在给药组与对照组间平行开展全部指标检测。适用场景血小板糖蛋白抑制剂干预评价、神经酰胺通路分析、干细胞移植保护作用研究、TLR4-Slit2/Robo4信号轴免疫调控研究以及内皮细胞损伤干预评价等。联检数据经统一统计处理后出具结构化报告，据此还原干预手段的作用环节与强度。
