c57bl/6小鼠也被称为c57 black 6，1921年被培育出来，属于近交品系。该品系的最主要的两个特点就是品系稳定和易于繁殖。另外c57bl/6小鼠是第一个完成基因组测序的小鼠品系。

利用CRISPR /Cas9 技术，建立CTLA4基因人源化小鼠模型，利用PCR、RT-PCR和Western Blot 的方法进行鉴定及分析。

1基因型鉴定

   在基因水平鉴定，可以检测到纯合小鼠。

2 该基因在敲除组织部位的蛋白表达水平

  对人源化小鼠组织取材，在白细胞中，通过反转录PCR只检测到人源CTLA4基因的表达。

3生长发育和生存率情况

  该基因人源化小鼠寿命正常，组织器官中未观察等到淋巴细胞的浸润，在出生后10个月内没有观察到自身免疫性疾病发展的迹象，也未观察到生长情况异常。

    4 CTLA4人源化小鼠中，CTLA4单克隆抗体伊匹木减缓肿瘤生长速度

目前批准用于临床的抗CTLA4抗体可以与人源CTLA4结合，但不会与鼠源CTLA4交叉反应^[11]。为了检测建立的CTLA4^h/h小鼠是否可以用于临床药物筛选，我们比较了CTLA4单克隆抗体伊匹木（Ipilimumab）在CTLA4^h/h 和CTLA4^m/m小鼠中抑制肿瘤生长的能力。用黑色素瘤细胞系B16分别移植入CTLA4^h/h 和CTLA4^m/m小鼠，在移植后第3、5、7天，伊匹木单抗以100μg/只的剂量进行3次腹腔注射，观察肿瘤生长至14天。在CTLA4^h/h小鼠中，伊匹木单抗减缓肿瘤生长速度（图6a，b），在第14天时，CTLA4^h/h小鼠中肿瘤质量低于CTLA4^m/m小鼠（图6c，d）。结果显示，伊匹木单抗可以在我们建立的CTLA4^h/h小鼠中发挥有效作用。

注：向CTLA4^h/h（左腋下）和CTLA4^m/m小鼠（右腋下）皮下注射5×10⁵ B16黑色素瘤细胞，并在第3、5、7天（如箭头所示），腹腔注射依匹木单抗100μg/只，观察并测量肿瘤直径至细胞移植后14天（a，b）。在细胞移植后14天时取出肿瘤称重（c，d）。数据表示平均值±标准误，每组6–8只小鼠。使用单因素方差分析（Dunnett’s test）进行统计。*P < 0.05, P < 0.01。

图5在CTLA4^h/h小鼠中，伊匹木减缓B16黑色素瘤生长速度