小鼠淋巴瘤细胞Tk基因突变检测
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发布时间:2025-07-10 12:16:58 更新时间:2025-07-09 12:16:58
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作者:中科光析科学技术研究所检测中心
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小鼠淋巴瘤细胞Tk基因突变检测(Mouse Lymphoma Assay, MLA)是一项关键的遗传毒性测试,广泛应用于制药、化工和环境毒理学领域。该检测通过评估化学物质或辐射对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞中胸苷激酶(Tk)基因的致突变性,预测潜在遗传损伤风险。Tk基因杂合性(Tk+/-)使细胞对三氟胸苷(TFT)敏感,突变可导致抗性表型,为定量分析突变频率提供可靠模型。该检测能同时评估基因突变和染色体损伤,是OECD、ICH等国际机构推荐的标准化测试之一。
核心检测项目包括:
1. 自发突变频率测定:未处理细胞的基线突变率;
2. 诱导突变频率测定:受试物处理后的突变率变化;
3. 剂量-效应关系分析:不同浓度受试物的致突变性梯度评估;
4. 克隆形态学分类:区分小集落(染色体畸变主导)与大集落(基因突变主导)。
关键实验设备包括:
- CO2恒温培养箱(维持37°C, 5% CO2环境)
- 生物安全柜(II级)
- 流式细胞仪(细胞计数与活力分析)
- 自动克隆计数仪
- 酶标仪(MTT法检测细胞毒性)
- 倒置显微镜(集落形态观察)
采用OECD 490标准流程:
1. 细胞培养与处理:L5178Y Tk+/-细胞在RPMI-1640培养基中培养,添加马血清及代谢活化系统(如S9混合液)。
2. 暴露与恢复:受试物处理3-6小时后更换新鲜培养基,持续培养2天表达突变表型。
3. 抗性筛选:接种于含4μg/mL TFT的培养板,突变细胞形成抗性集落。
4. 数据采集:7-10天后统计集落数量,计算相对存活率与突变频率(MF=突变集落数/存活细胞数×106)。
主要遵循国际规范:
- OECD 490:体外哺乳动物细胞基因突变试验指导原则
- ICH S2(R1):药物遗传毒性测试标准
- ISO 10993-3:医疗器械遗传毒性评价
数据判读标准:
- 阳性结果:突变频率≥背景值3倍,且具剂量依赖性
- 阴性确认:最高无毒浓度下MF未显著升高
- 需满足细胞存活率>20%及溶剂对照组自发MF在50-200×10-6范围
证书编号:241520345370
证书编号:CNAS L22006
证书编号:ISO9001-2024001
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